紅藻和藍(lán)藻藻膽蛋白和藻膽體的體外組裝特性及缺氮和恢復(fù)過程中藻膽體結(jié)構(gòu)變化的動(dòng)態(tài)過程研究.pdf

1、從海洋大型紅藻多管藻中分離純化到R-藻紅蛋白(RPE).將多管藻在蒸餾水中自溶,然后離心,上清液用硫酸銨沉淀,5mM磷酸緩沖液透析,然后用DEAESepharose Fast Flow進(jìn)行pH梯度洗脫,收集R-藻紅蛋白洗脫峰,測定其光譜特性.分離得到的R-藻紅蛋白的吸收光譜中有三個(gè)吸收峰,分別為565nm、539nm和498nm,用498nm激發(fā),熒光發(fā)射峰為574nm,最高吸收峰(565nm)與蛋白的特征吸收峰(280nm)的比值A(chǔ)<

2、,565>/A<,280>達(dá)到了5.6,Native-PAGE表明,只有一條蛋白帶,說明分離得到的R-藻紅蛋白是純化的.從鈍頂螺旋藻中分離純化出C-藻藍(lán)蛋白(CPC)和異藻藍(lán)蛋白(APC).將鈍頂螺旋藻藻體浸入5mM的磷酸緩沖液,在-20℃凍融,15000g離心,硫酸銨沉淀,10mM磷酸緩沖液透析,然后用羥基磷灰石柱層析,20mM磷酸緩沖液(pH7.0,0.1M NaCl)洗脫,收集CPC,然后用100mM磷酸緩沖液(pH7.0,0.1

3、M NaCl)洗脫,收集APC,然后,分別經(jīng)P300柱層析,分離得到純化的CPC和APC,光譜檢測表明,CPC和APC的特征吸收峰分別為620nm和650nm,熒光發(fā)射峰分別位于650nm和665nm,A<,620>/A<,280>和A<,650>/A<,280>的比值分別達(dá)到4.03和3.91,Native-PAGE檢測表明,沒有其它雜蛋白.對三種藻膽蛋白在溶液中的分子與分子之間相互作用與聚集行為進(jìn)行了研究.應(yīng)用我們設(shè)計(jì)的簡易方法制備

4、了鈍頂螺旋藻藻膽體(張玉忠等,海洋科學(xué),1997,6,39-42),用戊二醛進(jìn)行固定,滴加于噴碳的銅網(wǎng)上,在銅網(wǎng)上吸附1min,然后用磷鎢酸染色,TEM觀察,結(jié)果表明,鈍頂螺旋藻藻膽體在電鏡銅網(wǎng)上吸附時(shí),具有自組裝特性,自組裝形成的聚集體形狀相似,類似"雪花"狀,具有明顯的分形特性,符合DLA分形模型.為了進(jìn)一步研究鈍頂螺旋藻藻膽體在體外的聚集特性,將鈍頂螺旋藻藻膽體滴加于空氣/水界面上,應(yīng)用LB膜技術(shù)制備藻膽體LB膜.鈍頂螺旋藻在缺氮