紅毛藻及壇紫菜藻紅蛋白的分離純化與相關(guān)性質(zhì)的研究.pdf

1、本研究以營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高且蛋白質(zhì)含量豐富的紅毛藻為原材料，通過(guò)硫酸銨分級(jí)鹽析和陰離子交換柱層析兩種方法結(jié)合，快速高效地分離純化紅毛藻藻紅蛋白，并對(duì)該蛋白的光譜學(xué)性質(zhì)，亞基組成，穩(wěn)定性，抗氧化性及食用安全性等進(jìn)行研究。此外，為了對(duì)藻紅蛋白的性質(zhì)作深入了解，本研究還從壇紫菜中分離純化藻紅蛋白，并對(duì)這兩種藻紅蛋白的性質(zhì)進(jìn)行了比較分析。 本實(shí)驗(yàn)首次采用鹽濃度線性梯度和pH值線性梯度相結(jié)合的混合梯度方式對(duì)吸附于DEAE-Sepharose陰離子

2、交換柱的蛋白進(jìn)行洗脫，從而分離純化得到高純度藻紅蛋白。最終純化的紅毛藻藻紅蛋白的純度系數(shù)(A565/A280)為4.5，得率約為0.8 g/100 g紅毛藻；壇紫菜藻紅蛋白的純度系數(shù)為3.6，得率約為0.1 g/100 g壇紫菜。根據(jù)其可見(jiàn)光光譜學(xué)特征判斷兩種藻紅蛋白均屬于R-藻紅蛋白，熒光發(fā)射峰位于572 nm左右。紅毛藻藻紅蛋白的a、b和g亞基的相對(duì)分子質(zhì)量分別約為19 kDa、21kDa和27kDa。壇紫菜藻紅蛋白的a、b和g亞基

3、的相對(duì)分子質(zhì)量分別約為21kDa、22kDa和32kDa。 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：藻紅蛋白在pH值為中性及偏酸性時(shí)，具有較好的穩(wěn)定性，pH值為強(qiáng)堿性時(shí)，蛋白不穩(wěn)定。藻紅蛋白在溫度低于50 ℃時(shí)具有良好的穩(wěn)定性。短時(shí)間可見(jiàn)光、紫外光照射對(duì)藻紅蛋白的吸收光譜特征影響較小，而短時(shí)間紅外光照射對(duì)蛋白穩(wěn)定性有一定程度的破壞，故要長(zhǎng)時(shí)間保存該蛋白仍須低溫、避光。此外，微波對(duì)藻紅蛋白有較強(qiáng)的破壞力。 藻紅蛋白具有抗氧化活性，特別是紅毛藻