體外循環(huán)下低pH液復(fù)灌對(duì)兔缺血再灌注心肌內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、本文分析了體外循環(huán)下低pH液復(fù)灌對(duì)兔缺血再灌注心肌內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與細(xì)胞凋亡的影響。本研究分為兩個(gè)部分：
　　 第一部分：體外循環(huán)下低pH液復(fù)灌對(duì)兔心肌缺血再灌注損傷的影響。
　　 目的：探討體外循環(huán)(cardiopulmonary bypass,CPB)下再灌注初短暫低pH液復(fù)灌對(duì)兔心肌缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)損傷的保護(hù)作用并確定灌注液的最佳pH值。
　　 方法：選擇健康成年新西

2、蘭大白兔36只,雌雄不拘,體重2.5-3.0kg,隨機(jī)分為6組(n=6):對(duì)照組(C)不阻斷主動(dòng)脈,單純轉(zhuǎn)機(jī)3 h;缺血再灌注組(I/R)心臟停搏缺血40 min,再灌注2 h;其余各組心臟缺血40min,再灌注2 h,再灌注的前2 min分別給予pH值為7.4、7.1、6.9、6.7的Krebs-Henseleit液(K-H液)持續(xù)灌注至主動(dòng)脈開放。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,比色法測(cè)定心肌組織中乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase

3、,LDH)活性及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)測(cè)定肌鈣蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)濃度;光鏡觀察心肌組織形態(tài)學(xué)改變;透射電鏡下觀察心肌組織超微結(jié)構(gòu)。
　　 結(jié)果：與對(duì)照組比較,各組心肌組織LDH活性、cTnI濃度均增加(P＜0.05),與I/R組比較,pH7.4組LDH活性及cTnI濃度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,低pH液復(fù)灌各組LDH活性、c

4、TnI濃度均降低(P＜0.05),其中pH6.9組最低;病理學(xué)檢查示I/R組及pH7.4組損傷最為嚴(yán)重,低pH液復(fù)灌各組中pH6.9組損傷最輕。
　　 結(jié)論：體外循環(huán)下再灌注初短暫低pH液復(fù)灌產(chǎn)生心肌保護(hù)作用,且pH6.9的K-H液灌注產(chǎn)生的效果最好。
　　 第二部分：低pH液復(fù)灌對(duì)兔缺血再灌注心肌內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與細(xì)胞凋亡的影響。
　　 目的：探討CPB下再灌注初短暫低pH液復(fù)灌對(duì)兔I/R心肌內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endopl

5、asmic reticulum stress,ERS)與細(xì)胞凋亡的影響。
　　 方法：健康成年新西蘭大白兔30只,雌雄不拘,體重2.5～3.0 kg,隨機(jī)分為5組(n=6):對(duì)照組(C)不阻斷主動(dòng)脈,單純轉(zhuǎn)機(jī)3 h;缺血再灌注組(I/R)心臟停搏缺血40 min,再灌注2 h;pH7.4組與pH6.9組心肌缺血40 min,再灌注2 h,再灌注前2 min分別給予pH7.4、6.9的K-H液持續(xù)灌注至主動(dòng)脈開放;缺血后處理組(I

6、-postC)心肌缺血40 min后,于2 h的再灌注的前2min給予10 s再灌/10 s缺血共6次的缺血后處理。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,比色法測(cè)定心肌組織中LDH活性;ELISA測(cè)定cTnI濃度;末端脫氧核苷?；D(zhuǎn)移酶介導(dǎo)性dUTP切口末端標(biāo)記(terminal deoxynucleotidyl transferase-medialated dUTP nick end labeling,TUNEL)檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡情況;逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(re

7、versetranscription polymerase chain reation,RT-PCR)檢測(cè)ERS分子葡萄糖調(diào)節(jié)蛋自78(glucose-regulated protein78,GRP78)、鈣網(wǎng)蛋白(calreticulin,CRT)mRNA的表達(dá);免疫組化及蛋白質(zhì)印跡(Western blot)檢測(cè)凋亡分子caspase-12、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)蛋白表達(dá)以及

8、透射電鏡觀察心肌組織超微結(jié)構(gòu)改變。
　　 結(jié)果：與C組比較,其余各組LDH活性、cTnI濃度、心肌細(xì)胞凋亡率、GRP78與CRTmRNA表達(dá)、以及caspase-12與CHOP蛋白表達(dá)均明顯增加(P＜0.05);與I/R組比較,pH7.4組各指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,各檢測(cè)指標(biāo)在pH6.9組及I-postC組均降低(P＜0.05),而后兩者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。心肌組織超微結(jié)構(gòu)觀察示C組結(jié)構(gòu)基本正常,I/R組及pH7