天山雪蓮細(xì)胞培養(yǎng)物體外抗骨質(zhì)疏松作用研究.pdf

1、骨質(zhì)疏松癥現(xiàn)已成為全球性的公共健康問題。成骨細(xì)胞介導(dǎo)骨形成和破骨細(xì)胞介導(dǎo)骨吸收，二者動(dòng)態(tài)平衡被破壞是引發(fā)骨質(zhì)疏松的內(nèi)在原因。天山雪蓮（Saussureainvolucrata Kar.et Kir，S.involucrata）是我國稀有的傳統(tǒng)名貴藥材，具有補(bǔ)腎活血，強(qiáng)筋骨，溫腎助陽等功效。雪蓮培養(yǎng)物是采用現(xiàn)代生物技術(shù)而獲得的愈傷組織團(tuán)塊或細(xì)胞，其藥理及功效研究是當(dāng)今天山雪蓮研究及開發(fā)的熱點(diǎn)。本論文研究是以人成骨細(xì)胞MG-63為對(duì)象，探究

2、天山雪蓮細(xì)胞培養(yǎng)物對(duì)成骨細(xì)胞增殖、發(fā)育的影響及作用機(jī)制，以小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7作為破骨前體細(xì)胞，探討其對(duì)破骨細(xì)胞形成的影響以及對(duì)成熟破骨細(xì)胞的作用。
　　RAW264.7細(xì)胞在核因子-κB受體活化因子配體（RANKL）誘導(dǎo)下分化為破骨細(xì)胞。雪蓮培養(yǎng)物的加入可抑制破骨細(xì)胞的形成，并且劑量依賴性地降低抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）活性。對(duì)已形成的破骨細(xì)胞，乳酸脫氫酶(LDH)活性檢測(cè)和Annexin V-PI雙染流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果

3、一致，雪蓮培養(yǎng)物可破壞破骨細(xì)胞細(xì)胞膜，增加胞外LDH酶活，誘導(dǎo)破骨細(xì)胞凋亡。RT-PCR結(jié)果進(jìn)一步說明，天山雪蓮細(xì)胞培養(yǎng)物通過下調(diào)TRAP和基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-9) mRNA表達(dá)抑制破骨細(xì)胞骨吸收功能。
　　以MG-63細(xì)胞為研究對(duì)象，MTT結(jié)果表明，黃酮濃度為31.25μg/mL和62.5μg/mL的天山雪蓮細(xì)胞培養(yǎng)物對(duì)成骨細(xì)胞無細(xì)胞毒性，125μg/mL濃度下有細(xì)胞毒性。天山雪蓮細(xì)胞培養(yǎng)物可顯著提高堿性磷酸酶(ALP)活性

4、從而促進(jìn)其早期分化;天山雪蓮細(xì)胞培養(yǎng)物還可提高膠原蛋白中的4．羥脯氨酸含量，并促進(jìn)礦化結(jié)節(jié)形成，從而促進(jìn)成骨細(xì)胞礦化;同時(shí)，并上調(diào)OPG/RANKL表達(dá)比值，從而影響骨形成活性。以p38特異性抑制劑SB203580干預(yù)成骨細(xì)胞，結(jié)果表明SB203580顯著抑制天山雪蓮細(xì)胞培養(yǎng)物對(duì)成骨細(xì)胞增殖、ALP活性、礦化結(jié)節(jié)形成的促進(jìn)作用以及對(duì)膠原蛋白積累量的提高作用;并抑制天山雪蓮細(xì)胞培養(yǎng)物對(duì)成骨細(xì)胞OPG/RANKL表達(dá)的上調(diào)，說明天山雪蓮細(xì)胞