內(nèi)源性H2S在膿毒癥膈肌損傷中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　本論文研究首先將明確膈肌組織中是否存在硫化氫合成酶，在此基礎(chǔ)上，觀察膿毒癥對膈肌組織內(nèi)源性硫化氫合成的影響；并從H2S改善線粒體功能障礙和抑制炎性因子生成及抗氧化損傷的角度探討內(nèi)源性H2S對膿毒癥膈肌功能障礙的保護(hù)作用。并觀察H2S對膿毒癥大鼠生存率的影響。
　　內(nèi)容和方法：
　　清潔級健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠按完全隨機(jī)分組法分成四組：A組：假手術(shù)(Sham)組；B組：盲腸結(jié)扎穿孔(

2、Cecal Ligation and Puncture，CLP)組；C組：硫氫化鈉（NaHS）組；D組：盲腸結(jié)扎穿孔+硫氫化鈉（CLP+NaHS）組。
　　1.首先通過Western Blot和免疫組化的方法檢測正常膈肌中是否有H2S合成酶的存在。然后制作CLP膿毒癥模型，于術(shù)后24h時取膈肌組織，分別檢測A組、B組中硫化氫合成酶 CBS（胱硫醚-β-合成酶）、CSE（胱硫醚-γ-裂解酶）和3-MST（3-羥基丙酮酸硫轉(zhuǎn)移酶）含量

3、的變化。
　　2.按如上分組，24h后取新鮮的膈肌組織，采用肌張力分析儀檢測各組離體膈肌收縮的功能。
　　3.按如上分組，24h后取新鮮的膈肌組織進(jìn)行線粒體的提取，并對線粒體進(jìn)行 MitoSOX染色和JC-1染色分別檢測線粒體中活性氧ROS的生成量和線粒體膜電位變化，并檢測線粒體中ATP的含量。
　　4.按如上分組，A組、B組和D組大鼠24h后取新鮮膈肌組織進(jìn)行電鏡標(biāo)本的制作并鏡檢。
　　5.按如上分組，對24h

4、的膈肌組織標(biāo)本進(jìn)行促炎因子TNF-α（腫瘤壞死因子-α）、IL-6（白介素-6）和氧化應(yīng)激指標(biāo)MDA（丙二醛）、SOD（超氧化物歧化酶）含量的檢測。
　　6.將80只SD大鼠按上述分組，每組20只，觀察7天生存率。
　　主要結(jié)果：
　　1.在大鼠膈肌組織中存在硫化氫合成酶 CBS、CSE和3-MST。
　　2.膿毒癥時膈肌組織中硫化氫合成酶CBS和CSE的表達(dá)顯著降低，對3-MST的影響無顯著差異。
　　3

5、.膿毒癥時膈肌肌張力及最大強(qiáng)直肌力下降，且給予NaHS后可明顯改善膈肌收縮功能。
　　4.膿毒癥可導(dǎo)致膈肌線粒體氧化應(yīng)激損傷且可導(dǎo)致膈肌肌纖維和線粒體超微結(jié)構(gòu)的改變，NaHS可逆轉(zhuǎn)這一現(xiàn)象。5.膿毒癥導(dǎo)致膈肌組織中炎癥因子增高，氧化應(yīng)激產(chǎn)物增加，給予NaHS后，可顯著下調(diào)膈肌炎癥因子并明顯減少氧自由基的釋放。6.NaHS可顯著提高膿毒癥大鼠的生存率。
　　結(jié)論：
　　膿毒癥可導(dǎo)致膈肌功能障礙，而內(nèi)源性 H2S在膿毒癥誘