抑制內(nèi)源性硫化氫生成加重尿源性膿毒癥腎損傷的腎細(xì)胞凋亡.pdf

1、目的：復(fù)制兔尿源性膿毒血癥模型，應(yīng)用胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）抑制劑 DL-炔丙基甘氨酸（DL-Propargylglycine，PAG）抑制內(nèi)源性硫化氫的生成,觀察兔腎組織Bcl-2、Bax、CSE及NF-κB的表達(dá)及腎臟組織細(xì)胞凋亡情況，明確內(nèi)源性硫化氫對尿源性膿毒血癥腎臟細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制。
　　方法：1、將兔左側(cè)輸尿管遠(yuǎn)端結(jié)扎，在其近端注入大腸桿菌（ATCC25922），制造尿源性膿毒血癥動(dòng)物模型；
　　2、將

2、32只健康雄性兔(1.8-2.2Kg/只)隨機(jī)分為4組：對照組（A組）；假手術(shù)組（B組）；尿源性膿毒血癥組（C組）；PAG組（D組），每組8只；
　　3、將各組分為術(shù)前，術(shù)后12h、24h、36h、48h，5個(gè)時(shí)間點(diǎn)觀測肛溫(RT)、呼吸(RR)和心率(HR)等指標(biāo)；
　　4、5個(gè)時(shí)間點(diǎn)采血，行外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)分析、腎功能(Cr、BUN）測定；
　　5、術(shù)后48小時(shí)測血漿硫化氫濃度；
　　6、術(shù)后48小時(shí)各組兔處

3、死后取腎組織HE染色，并觀察其
　　結(jié)構(gòu)形態(tài)的變化；PCR法檢測各組兔Bcl-2、Bax及CSE的表達(dá)；Tunel法檢測其腎組織細(xì)胞凋亡；免疫組化法檢測兔腎組織中NF-κB的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.各組兔術(shù)前、術(shù)后各體溫、呼吸及心率比較：A組與B組體溫、呼吸及心率情況相比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；C組高于A、B兩組（P＜0.05），D組高于C組（P＜0.05）。
　　2.抽血結(jié)果比較：各組兔術(shù)前白細(xì)胞、

4、中性粒細(xì)胞、血肌酐（CR）、血尿素氮（BUN），無明顯差異，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)的血白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞；CR、BUN結(jié)果：A組與B組相比，無明顯差異（P＞0.05）；C組各指標(biāo)值高于A、B兩組（P＜0.05）；D組與C組相比各指標(biāo)均呈上升趨勢，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.術(shù)后48H血漿H2S濃度檢測：A、B組血漿H2S的含量相比無明顯差異，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。C、D兩組血漿H2S的含量與A、B組相比明顯

5、降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其中 D組血漿 H2S的含量較C組明顯降低，差異顯著有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　4.病理形態(tài)改變：HE染色：A、B兩組兔腎組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)大致相同，呈正常形態(tài)；C組腎組織充血、膿腫，大量炎癥細(xì)胞浸潤，腎小球與腎小囊、腎小管出現(xiàn)形態(tài)改變；D組比C組腎臟病理損害更嚴(yán)重。
　　5.RT-PCR法檢測：腎臟組織中Bax、Bcl-2及CSE的表達(dá)情況：A組與B組Bax、Bcl-2、CSE的

6、表達(dá)相差不大；Bax的表達(dá)于D組最強(qiáng)，相反Bcl-2及CSE于D組表達(dá)最微弱；D組與C組相比Bax表達(dá)明顯增強(qiáng)，而Bcl-2及CSE表達(dá)明顯減弱。
　　6. TUNEL法檢測腎組織的細(xì)胞凋亡：A、B兩組可見少量腎小
　　管的上皮細(xì)胞凋亡。C組可見成片的細(xì)胞凋亡和凋亡小體形成，與A、B兩組凋亡指數(shù)相比差異明顯（P<0.05）。D組較C組腎組織細(xì)胞凋亡情況嚴(yán)重，呈廣泛片狀（P<0.05）。
　　7.免疫組化法檢測各組兔 N

7、F-ΚB蛋白的表達(dá)情況：A、B組NF-ΚB蛋白檢測相比無明顯差異，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；C組術(shù)后48h中NF-ΚB的蛋白與A、B組比較明顯增強(qiáng)（P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；D組術(shù)后48h NF-ΚB的蛋白與C組相比亦有增強(qiáng)（P<0.05）有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：1、成功復(fù)制兔尿源性膿毒血癥模型；
　　2、應(yīng)用PAG可抑制兔尿源性膿毒血癥內(nèi)源性H2S的生成，加重了尿源性膿毒血癥腎損傷；其機(jī)制可能是通過上調(diào)NF-