硫化氫對尿源性膿毒血癥急性腎損傷的保護作用及其機制.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  建立尿源性膿毒血癥兔模型;觀察尿源性膿毒血癥腎組織內(nèi)源性H2S生成及其 H2S胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)的變化;應用外源性硫化氫干預,探討外源性硫化氫在尿源性膿毒血癥急性腎損傷中的作用,了解H2S對尿源性膿毒血癥腎組織NF-κB表達的影響,從而揭示H2S在尿源性膿毒血癥腎損害中作用的可能機制。
  方法:
  1、家兔左側(cè)輸尿管內(nèi)注入大腸桿菌(ATCC25922),并結(jié)扎左側(cè)輸尿管遠端,模擬上尿路急性梗阻

2、并感染所致膿毒血癥兔模型。
  2、將30只健康雄性家兔隨機分成五組,每組6只。正常組(Control組);假手術組(Sham組);膿毒血癥組(sepsis組);硫氫化鈉2.8umol/kg組(NaHS2.8umol/kg組);硫氫化鈉8.4umol/kg組(NaHS8.4umol/kg組)。
  3、每組動物按時間點又分為術前、術后24h、術后48h、術后72h4個時間觀測點。分別于每個時間點觀測肛溫(RT)、呼吸(RR)

3、、心率(HR);
  4、術前、術后24、48、72小時采血行外周血細胞計數(shù)分析(WBC、中性粒細胞、PLT)、腎功能(Cr、BUN)、血清C反應蛋白測定;
  5、術前、術后24h、術后48h、術后72h4個時間點采血ELISA法測定血清TNF-α、IL-10含量;術后72h抽血血培養(yǎng),血清鱟試驗檢測;
  6、術后72h各組腎組織行HE染色,光學顯微鏡及透射電子顯微鏡下觀察形態(tài)結(jié)構變化。免疫組織化學法檢測各組腎組織

4、的TNF-α、IL-10、NF-κB的蛋白表達。Tunel法檢測腎組織細胞凋亡情況。
  7、術后72h取腎組織檢測CSE的活性;抽血測H2S濃度。
  結(jié)果:
  1.家兔的一般情況:實驗家兔sham組與control組體溫,呼吸頻率、心率變化不大(P>0.05);sepsis組明顯高于 control、sham組(P<0.05), NaHS2.8umol/kg組、NaHS8.4umol/kg組低于 sepsis組(

5、P<0.05), NaHS8.4umol/kg組低于sepsis組(P<0.05)。
  2.血液檢測指標:各組術前血細胞計數(shù)(WBC、中性粒細胞、PLT)、CRP、Cr、Bun比較,無統(tǒng)計學意義。術后血細胞計數(shù)WBC、中性粒細胞、PLT、CRP、Cr、Bun結(jié)果:實驗家兔 control組與sham組比較,差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05);sepsis組明顯高于 control、sham組(P<0.05),NaHS2.8umol

6、/kg組、NaHS8.4umol/kg組有下降趨勢,有統(tǒng)計學意義(P<0.05),且NaHS8.4umol/kg組低于NaHS2.8umol/kg組(P<0.05)。
  家兔血清 TNF-α、IL-10含量結(jié)果:control、sham組家兔血清 TNF-α, IL-10變化無統(tǒng)計學意義(P<0.05);與control組比較,sepsis組明顯升高(P<0.05);NaHS2.8umol/kg組、NaHS8.4umol/kg組

7、與sepsis組比較,血清TNF-α明顯降低(P<0.05),血清IL-10明顯升高(P<0.05),NaHS8.4umol/kg組與NaHS2.8umol/kg組比較P<0.05。
  術后72小時采血做血培養(yǎng)及鱟試驗:sham組與control組比較P>0.05,差異無統(tǒng)計學意義。sepsis組與control組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。鱟試驗比血培養(yǎng)陽性率高(P=0.009)。
  3.病理形態(tài)學:

8、>  左腎肉眼觀:control組和sham組腎組織形態(tài)結(jié)構正常,sepsis組肉眼觀腎臟充血水腫,多發(fā)膿腫,腎盂腎盞擴張積膿,粘膜充血、出血、水腫,髓質(zhì)可見黃色條紋狀病灶向皮質(zhì)伸展,腎周圍組織充血水腫,腎門淋巴結(jié)明顯腫大。HE染色光鏡:sepsis組腎盂、腎盞粘膜壞死、脫落大量中性粒細胞浸潤,腎小球、腎小囊變形,腎小管管腔變大,腎間質(zhì)炎癥細胞浸潤;電鏡:sepsis組腎小球足突細胞融合、消失,系膜細胞和內(nèi)皮細胞增生,線粒體嵴排列紊亂,

9、空泡形成。NaHS2.8umol/kg組、NaHS8.4umol/kg組較sepsis組上述變化有所減輕。
  4.免疫組織化學法測腎組織 TNF-α、IL-10、NF-κB蛋白:control組、sham組腎組織TNF-α、IL-10、NF-κB蛋白呈微弱表達;TNF-α、NF-κB蛋白在sepsis組表達最強,NaHS2.8umol/kg組、NaHS8.4umol/kg組較sepsis組減弱;IL-10蛋白在 NaHS2.8u

10、mol/kg組、NaHS8.4umol/kg組表達增強, NaHS8.4umol/kg組高于NaHS2.8umol/kg組(P<0.05)。
  5.Tunel法檢測腎組織細胞凋亡:control、sham組腎組織散在少量的腎小管上皮細胞凋亡。sepsis組成片的細胞凋亡及凋亡小體形成,與control組比較P=0.001。NaHS2.8umol/kg組、NaHS8.4umol/kg組較sepsis組細胞凋亡明顯減輕(P<0.05

11、),NaHS8.4umol/kg組較NaHS2.8umol/kg組減輕更明顯(P=0.02)。
  6.術后72小時血漿硫化氫濃度及腎組織CSE檢測:sepsis組血漿H2S含量及腎組織 CSE的活性與control組比較明顯降低(P<0.05)。NaHS2.8umol/kg組、NaHS8.4umol/kg組血漿 H2S含量較 sepsis組明顯升高(P<0.05)。NaHS2.8umol/kg及NaHS8.4umol/kg組血漿

12、H2S含量與control組比較,P>0.05。NaHS2.8umol/kg組、NaHS8.4umol/kg組腎組織 CSE活性與sepsis組比較, P>0.05。Sepsis組 NaHS2.8umol/kg及 NaHS8.4umol/kg組腎組織 CSE活性與control組比較,P<0.05。Control組、sham組、sepsis組血漿H2S含量與腎組織CSE活性呈正相關(R=0.979,p<0.01),內(nèi)源性H2S的生成與C

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