新基因NELIN的功能研究.pdf

1、NELIN基因是一個(gè)利用RT-PCR的方法從臍靜脈mRNA中克隆到的一個(gè)新基因,生物信息學(xué)分析它與鼠微管連接蛋白(nexilin)具有很高的同源性(91%的氨基酸完全一致),故命名為NELIN(nexilin-like protein).該基因的cDNA全長(zhǎng)為2736bp,含有一個(gè)從412到1755bp共長(zhǎng)1344bp的開放讀碼框,推斷NELIN蛋白含有448個(gè)氨基酸殘基,該蛋白76~242位氨基酸含有一個(gè)F-actin結(jié)合結(jié)構(gòu)域.No

2、rthern雜交發(fā)現(xiàn)該基因存在著幾個(gè)轉(zhuǎn)錄本,主要的一個(gè)轉(zhuǎn)錄本為3.0kb,該轉(zhuǎn)錄本在心臟和骨骼肌中有非常高的表達(dá),在胎盤,肝,肺和胰臟中有微量表達(dá),在腦和腎臟中沒有檢測(cè)到.在八種腫瘤細(xì)胞系中(早幼粒白血病HL-60細(xì)胞系,宮頸癌細(xì)胞系HelaS3株,慢性粒細(xì)胞白血病K-562細(xì)胞系,淋巴母細(xì)胞白血病MOLT-4細(xì)胞系,Burkitt's淋巴瘤Raji,結(jié)腸腺癌SW480細(xì)胞系,肺癌A549細(xì)胞系,黑色素瘤G-361細(xì)胞系)中,只在Hel

3、a S3和MOLT-4腫瘤細(xì)胞系以不同的轉(zhuǎn)錄本微量表達(dá),在其它六種細(xì)胞系中沒有檢測(cè)到.本文主要研究了NELIN基因與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)之間的關(guān)系.通過與綠色熒光蛋白GFP相融合然后瞬時(shí)轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞觀察NELIN基因的亞細(xì)胞定位,結(jié)果顯示,GFP主要分布在細(xì)胞質(zhì)中,顯示NELIN是一個(gè)胞漿蛋白.用免疫熒光染色的方法,同樣證明了這個(gè)結(jié)果.由于NELIN基因包含有一個(gè)F-actin結(jié)合結(jié)構(gòu)域,促使我們建立NELIN基因與F-actin之間的聯(lián)系.免

4、疫熒光共定位的結(jié)果表明,NELIN基因與F-actin分布在胞漿的相同區(qū)域.免疫共沉淀的結(jié)果雖然沒有證明兩者直接的相互結(jié)合,但證明了NELIN基因與F-actin的相互關(guān)聯(lián).通過這種相互關(guān)聯(lián)提示我們,NELIN基因可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的結(jié)構(gòu)影響細(xì)胞的運(yùn)動(dòng).進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn),我們將NELIN基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞,粘附實(shí)驗(yàn)和Transwell分析發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染NELIN基因的Hela細(xì)胞的遷移率和粘附率顯著增加.這些結(jié)果表明,NELIN基因可