櫛江珧解剖配子的體外促熟研究.pdf

1、本論文以櫛江珧這種雙殼貝類為研究對象，通過氨海水、5-羥色胺等化學物質(zhì)促熟櫛江珧卵子或者刺激精子的激活，人工授精后進行早期胚胎發(fā)育觀察，為雙殼貝類體外促熟、遺傳育種提供理論依據(jù)。
　　1. pH與鹽度對櫛江珧精子激活及卵的體外促熟的影響
　?。?）選取性腺成熟度高的雄貝作為材料。以1mol/L的鹽酸和25％的分析純氨水調(diào)節(jié)激活劑，篩選能激活精子的最佳 pH，即精子的激活率和活力都最好。篩選出最佳pH后，在這個基礎(chǔ)上用海水晶和

2、蒸餾水調(diào)節(jié)消毒過濾海水的鹽度，進一步研究精子在不同鹽度梯度下的最佳激活率。結(jié)果顯示：溫度26℃、鹽度25時，pH≤8.0時，櫛江珧精子的激活率與活力均較低，pH在8.5－10.0之間激活率與活力均較高，其中pH為9.0時的活力最高，總運動時間約為60min。溫度26℃、pH9.0時，精子在鹽度15－40都能被激活，鹽度在25－35范圍內(nèi),精子激活率均很高,達100%,其中鹽度為25.0時，激烈運動時間、總運動時間均最長,分別達到30mi

3、n、57min；當激活液鹽度超過35以后,精子激活率與活力均顯著下降（P﹤0.05）。
　　（2）選取性腺成熟度高的雌貝作為材料，將解剖的卵子浸泡在不同pH值、不同鹽度（pH9.0）的消毒過濾海水中，取樣觀察并記錄卵子生發(fā)泡破裂情況，將已促熟的卵子和激活的精子混合授精，檢驗受精率。結(jié)果表明：水溫26℃、鹽度25，卵子促熟的最適pH為8.5－9.0，pH≥9.5時，卵子的受精率開始下降，畸形胚胎的比例也開始上升；水溫26℃、pH=9

4、.0，鹽度在20－35的范圍內(nèi)，櫛江珧卵子的促熟效果較好，其中以鹽度25的促熟效果最佳，促熟后的受精率達到70%左右。
　?。?）水溫26℃、鹽度25時，用pH9.0、9.5的氨海水預(yù)先處理櫛江珧卵子40－50min使大多數(shù)卵子的生發(fā)泡都消失，在不同pH、鹽度的消毒過濾海水中授精，試驗結(jié)果顯示：pH7.0－9.0之間受精率隨pH的增加而增加，pH﹥9.0時，受精率隨著pH的增加反而開始下降；鹽度10－25之間受精率隨著鹽度的增加而

5、增加，鹽度大于25時，受精率隨著鹽度的增加而下降。相比卵子未經(jīng)預(yù)先處理而直接在不同pH、鹽度的海水中授精所得的受精率，櫛江珧預(yù)先處理組的卵子在低pH、鹽度時受精率提高了8.0%－22.0%、20.0%－23.0%。
　　2.氨海水浸泡對櫛江珧卵子促熟的影響
　　櫛江珧精子在海水中幾乎不能激活，氨海水0.10－0.30‰刺激，激活效果達到90%以上。氨海水促熟卵子的適宜濃度為0.10－0.20‰，受精率達到50%－60%左右，

6、考慮0.20‰氨海水濃度組受精后產(chǎn)生的畸形胚胎的比例較高，因此，氨海水促熟的最適濃度為0.10－0.15‰,櫛江珧最佳的授精時間為40－60min，在最佳時間內(nèi)授精，0.05－0.15‰氨海水組受精率比20min時授精的受精率提高了5.66%－13.90%。
　　3.5－HT對櫛江珧解剖配子體外促熟
　　5－HT是一種酸性化學物質(zhì)，精子在5－HT處理液中激活率較低，大部分的精子只能在原地顫動。5－HT不能促進櫛江珧卵子生發(fā)泡

7、的破裂，與氨海水聯(lián)合處理時表現(xiàn)出相互的抑制；預(yù)先用氨海水處理再用5－HT處理，5－HT對卵子促熟的效果仍不明顯，試驗的受精率比單獨用氨海水處理低得多。
　　4.氨海水對櫛江珧早期胚胎發(fā)育的影響
　　在第三章試驗結(jié)果的基礎(chǔ)上進行人工授精及胚胎發(fā)育的觀察。結(jié)果表明：氨海水濃度為0.10－0.15‰受精率、孵化率較高且畸形的胚胎相對較低。在試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)解剖法在小試驗和生產(chǎn)中是一種快速育苗的方法，育苗成功的關(guān)鍵在于性腺成熟度要高，氨