GSK-3β抑制劑氯化鋰對(duì)高糖造成的足細(xì)胞損傷的意義.pdf

1、背景和目的:高糖可造成足細(xì)胞發(fā)生一系列損傷,包括足細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化,足細(xì)胞活力下降,凋亡增加等。糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthasekinase-3β,GSK-3β)在足細(xì)胞中含量豐富,功能多樣,參與了包括細(xì)胞黏附、轉(zhuǎn)分化、凋亡、遷移等多種病理生理過程。有研究發(fā)現(xiàn)GSK-3β抑制劑可誘導(dǎo)皮膚上皮細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)分化,亦有研究表明GSK-3β抑制劑可減少高糖條件下腎小球系膜細(xì)胞的凋亡。說明目前對(duì)于GSK-3β抑制劑的作

2、用還存在爭(zhēng)議。那么對(duì)于高糖刺激條件下的足細(xì)胞,GSK-3β抑制劑有無保護(hù)作用,及GSK-3β活性改變對(duì)高糖導(dǎo)致足細(xì)胞損傷的意義尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)擬利用RT-PCR、Western blot檢測(cè)足細(xì)胞標(biāo)記蛋白和凋亡相關(guān)基因的表達(dá)變化,并利用流式細(xì)胞術(shù)及MTT法檢測(cè)足細(xì)胞足細(xì)胞活力變化及凋亡情況,觀察GSK-3β在高糖導(dǎo)致的足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化和凋亡過程中的作用,及GSK-3β抑制劑對(duì)高糖損傷足細(xì)胞的意義。
　　 方法：33℃許可條件下用含1

3、0％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)條件永生化小鼠足細(xì)胞系,并在37℃非許可條件下培養(yǎng)14天誘導(dǎo)其分化,Western blot檢測(cè)Synaptopodin鑒定其分化成熟,將分化成熟的足細(xì)胞分為4組,(1)正常糖濃度組,足細(xì)胞培養(yǎng)基含葡萄糖5.6mmol/L,(2)高糖組,足細(xì)胞培養(yǎng)基含葡萄糖30mmol/L,(3)LiCl組,足細(xì)胞培養(yǎng)基含LiCl10mmol/L,(4)高糖+LiCl組,足細(xì)胞培養(yǎng)基含葡萄糖30mmoI/L,Li

4、Cl10mmol/L,48小時(shí)后MTT法檢測(cè)足細(xì)胞存活率,RT-PCR檢測(cè)Bcl-2、Bax的mRNA水平,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)足細(xì)胞凋亡率,Western-blot檢測(cè)nephrin、α-SMA蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.37℃非許可條件下培養(yǎng)14天,顯微鏡下觀察分化成熟的足細(xì)胞呈星形多突狀,核圓形,從胞體伸出很多突起,可見次級(jí)足突,Western-blot檢測(cè)分化成熟足細(xì)胞Synaptopodin表達(dá)陽性。

5、>　　 2.按上述分組培養(yǎng)足細(xì)胞48小時(shí),MTT法檢測(cè)足細(xì)胞存活率,高糖組、高糖+LiCl組均較正常組明顯下降(P＜0.05),LiCl組較正常組下降(P＜0.05),高糖+LiCl組較高糖組存活率下降(P＜0.05)。
　　 3.RT-PCR檢測(cè)Bcl-2 mRNA水平,高糖組、LiCl組較正常組下降(P＜0.05),高糖+LiCl組基本無表達(dá);Bax mRNA表達(dá)水平,高糖組、LiCl組較正常組增加(P＜0.05),高糖+

6、LiCl組較正常組、高糖組明顯增加(P＜0.05)。
　　 4.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)足細(xì)胞凋亡率,高糖組較正常組增加(P＜0.05),LiCl組較正常組無明顯差異(P＞0.05),高糖+LiCl組較高糖組明顯增加(P＜0.05)。
　　 5.Western-blot檢測(cè)nephrin表達(dá),高糖組、高糖+LiCl組、LiCl組均較正常組明顯減少(P＜0.05),高糖+LiCl組與高糖組相比表達(dá)進(jìn)一步下降(P＜0.05);α-SM

7、A表達(dá),高糖組、高糖+LiCl組、LiCl組均較正常組明顯增多(P＜0.05),高糖+LiCl組與高糖組相比表達(dá)增多(P＜0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.高糖導(dǎo)致足細(xì)胞生存活力下降,GSK-3β抑制劑LiCl使高糖環(huán)境下的足細(xì)胞活力進(jìn)一步下降。
　　 2.高糖可誘導(dǎo)足細(xì)胞凋亡,使抑凋亡基因Bcl-2 mRNA表達(dá)減少,促凋亡基因Bax mRNA表達(dá)增加,GSK-3β抑制劑在