阿苯達(dá)唑?qū)?dòng)脈再狹窄的治療效應(yīng)和機(jī)制研究.pdf

1、第一部分、阿苯達(dá)哩對(duì)血管平滑肌細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)和機(jī)制研究
　　目的:探討阿苯達(dá)挫體外對(duì)人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖遷移的影響，并進(jìn)一步分析其可能涉及的作用機(jī)制。
　　方法:體外實(shí)驗(yàn)分為濃度梯度試驗(yàn)與機(jī)制探討兩部分。其中濃度梯度部分設(shè)為4組:陰性對(duì)照組(A組)、阿苯達(dá)挫濃度組0.25μM(B組)、0.5μM(C組)、1μM(D組)；利用 CCK-8檢測(cè)各組細(xì)胞在干預(yù)24h、48h、72h后細(xì)胞增殖能力的變化；劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞在A

2、BZ干預(yù)10、24h后細(xì)胞遷移力的變化；Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞在ABZ干預(yù)10、24h后細(xì)胞遷移的變化；機(jī)制探討分為流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞在干預(yù)后24h細(xì)胞周期分布的變化，TUNEL檢測(cè)細(xì)胞調(diào)亡；Realtime PCR和 Westem blot技術(shù)測(cè)定阿苯達(dá)挫干預(yù)48h各組細(xì)胞中平滑肌表型轉(zhuǎn)換相關(guān)分子SMA、SM22α、MYHll在mRNA、蛋白水平上的相對(duì)表達(dá)量；Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞在干預(yù)48h后PI

3、3K/AktAnTOR表達(dá)量的變化。
　　結(jié)果:CCK8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示ABZ對(duì)人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 HASMCs表現(xiàn)出較好的增殖抑制作用，并對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖無明顯作用(24h內(nèi))；細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明ABZ可有效地抑制 HASMCs遷移和侵襲并呈劑量依賴性；ABZ可明顯抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的血管生成；PI單染和Western blot結(jié)果顯示ABZ可將HASMC細(xì)胞周期阻滯在G2M期，并且細(xì)胞周期相關(guān)蛋白細(xì)胞周期依賴性激酶1(

4、CDKl)和細(xì)胞周期蛋白B1(cyclinB1)的表達(dá)受到明顯抑制；RTPCR和 Western blot結(jié)果顯示ABZ上調(diào)平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)換相關(guān)分子SMA、SM22α、MYHI1；另外ABZ對(duì)HASMC細(xì)胞調(diào)亡無明顯作用；ABZ下調(diào)PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路，且呈濃度依賴性。
　　結(jié)論:阿苯達(dá)挫使血管平滑肌細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲能力明顯下降。其機(jī)制可能是阻滯了細(xì)胞周期并且影響了平滑肌細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)化，最后細(xì)胞的增殖、遷移能

5、力下降。
　　第二部分、阿苯達(dá)睡對(duì)小鼠股動(dòng)脈損傷再狹窄的治療效應(yīng)
　　目的:探討阿苯達(dá)挫在體內(nèi)對(duì)股動(dòng)脈損傷后再狹窄的作用。
　　方法:
　　(1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組:假手術(shù)組，對(duì)照組和阿苯達(dá)挫組；建立小鼠股動(dòng)脈導(dǎo)絲損傷模型:將8-12周BALB/c雄性小鼠分為3組，分別為假手術(shù)組，對(duì)照組和阿苯達(dá)挫組;阿苯達(dá)挫0.5mg灌胃4周，對(duì)照組PBS灌胃；
　　(2)HE(蘇木精-伊紅染液)染色:4周后，取損傷側(cè)股動(dòng)脈做H

6、E染色，鏡下觀察并計(jì)算新生內(nèi)膜面積；
　　(3)Evans藍(lán)染色:損傷模型建立第3、7天，與尾靜脈注射Evans藍(lán)染液，取出股動(dòng)脈，統(tǒng)計(jì)Evans藍(lán)染色比例，觀察內(nèi)皮再完全化程度。
　　結(jié)果:
　　(1)小鼠股動(dòng)脈導(dǎo)絲損傷模型建立成功，HE染色結(jié)果顯示，對(duì)照組內(nèi)膜明顯增厚，官腔狹窄，阿苯達(dá)挫可顯著抑制平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移，新生內(nèi)膜面積減少，內(nèi)膜/中膜比值明顯下降；
　　(2)Evans藍(lán)染色是評(píng)價(jià)內(nèi)皮再完全化的