透明質(zhì)酸對游離脂肪酸引起的HA-VSMC表達(dá)IL-6、IL-8和TNF-α的影響.pdf

1、目的：
　　探討透明質(zhì)酸（Hyaluronic acid,HA）對游離脂肪酸（Free fattyacid，F(xiàn)FA）引起的人主動脈血管平滑肌細(xì)胞（Human aortic vascularsmooth muscle cells，HA-VSMC）表達(dá)白介素-6（Interleukin-6，IL-6）、白細(xì)胞介素-8（Interleukin-8，IL-8）和腫瘤壞死因子-α（Tumor necrosis factorα,TNF-α）的

2、影響，為對血管病變的體內(nèi)研究和臨床治療提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　常規(guī)培養(yǎng)人HA-VSMC細(xì)胞系，采用不同濃度的FFA(0、100、200、400μmol/L)、不同濃度 FFA(0、100、200、400μmol/L)+高分子量透明質(zhì)酸（High molecular weight hyaluronic acid，HMW-HA,1mg/ml）和不同濃度FFA(0、100、200、400μmol/L)+低分子量透明質(zhì)

3、酸（Low molecular weight hyaluronic acid，LMW-HA,1mg/ml）處理細(xì)胞24、48h；采用MTT法檢測FFA、FFA+LMW-HA和FFA+HMW-HA對HA-VSMC細(xì)胞存活率的影響；采用EdU染色檢測不同處理后細(xì)胞增殖活性；采用ELISA試劑盒檢測培養(yǎng)上清IL-6、IL-8和TNF-α含量；采用實(shí)時熒光定量PCR法檢測IL-6、IL-8和TNF-α mRNA表達(dá)水平；蛋白印記法（Wester

4、n blot）檢測IL-6、IL-8和TNF-α蛋白水平的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、FFA在400μmol/L內(nèi)可誘導(dǎo)HA-VSMC增殖且有時間和濃度依賴性；
　　2、HMW-HA、LMW-HA均對FFA誘導(dǎo)的HA-VSMC增殖有抑制作用，且HMW-HA抑制作用強(qiáng)于LMW-HA；
　　3、FFA單獨(dú)和聯(lián)合高低分子量 HA處理細(xì)胞6、12、24、48h后細(xì)胞培養(yǎng)上清IL-6、IL-8和TNF-α隨培養(yǎng)濃度和時間的

5、增加而增加，HA可以抑制上述作用；
　　4、熒光定量PCR和Western blot結(jié)果顯示FFA+HMW-HA組和FFA+LMW-HA組IL-6、IL-8和TNF-α mRNA及其蛋白表達(dá)水平均低于FFA組，其中FFA+HMW-HA組又低于FFA+LMW-HA組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）。
　　結(jié)論：
　?。?）游離脂肪酸在400μmol/L內(nèi)可誘導(dǎo)HA-VSMC增殖且有濃度依賴性；
　?。?）HA

6、能抑制FFA引起的HA-VSMC增殖，且HMW-HA抑制作用強(qiáng)于LMW-HA；
　?。?）FFA顯著促進(jìn)HA-VSMC IL-6、IL-8和TNF-α的分泌，且有明顯的時間和濃度依耐性；
　　（4）FFA誘導(dǎo)HA-VSMC細(xì)胞IL-6、IL-8和TNF-α mRNA和蛋白表達(dá)升高；
　?。?）HA對FFA引起的HA-VSMC細(xì)胞表達(dá)IL-6、IL-8和TNF-α有抑制作用，下調(diào)IL-6、IL-8和TNF-α mRNA和