熱休克蛋白70結(jié)合TRAF6調(diào)節(jié)LPS激活的NF-κB信號通路的研究.pdf

1、熱休克蛋白70(HeatShockProtein70,HSP70)是HSP70家族的成員，進化上高度保守，其結(jié)構(gòu)主要由一個N端高度保守的ATPase功能域和一個C端區(qū)域組成，C端區(qū)域又可以分成一個保守的多肽結(jié)合功能域和一個不保守的靠近C端的可變區(qū)功能域。它具有分子伴侶功能，在腫瘤免疫中極可能是“腫瘤抗原”或“腫瘤抗原載體”，而且它也是細胞凋亡信號通路中重要的調(diào)節(jié)者。TRAF6(tumornecrosisreceptorassociate

2、dfactor6)是在1996年通過用CD40制成的探針，采用酵母雙雜交的方法篩選得到的。其結(jié)構(gòu)主要由N端的Ringfingerdomain、Zincfingerdomain和C端的Coiled-coildomain、TRAF-Cdomain組成。它識別并結(jié)合CD40及TRANCE-R受體質(zhì)膜區(qū)域的多肽結(jié)構(gòu)域(PXEXXAr/Ac，Ar代表芳香族氨基酸，Ac代表酸性氨基酸)，外界刺激引起TRAF6與CD40或TRANCE-R結(jié)合從而激活

3、NF-κB及MAPKs。此外，與其它家族成員不同，TRAF6還參與調(diào)節(jié)IL-1R/TLR家族信號通路。LPS(Lipopolysacchride，脂多糖，又稱內(nèi)毒素)，是格蘭氏陰性菌細胞外膜的主要成分，單核細胞通過表達多種炎癥因子協(xié)調(diào)對LPS的先天性免疫應答。LPS通過TLR4激活細胞，MyD88與TLR4結(jié)合后，IRAK隨之與這一復合物結(jié)合，所形成的復合物不與IKK復合物直接發(fā)生聯(lián)系，而是將信號傳導到并激活TRAF6，在這一過程中需要

4、TRAF6的泛素化，泛素化的TRAF6激活了一種稱之為TAK1的MAP3K激酶，TAK1隨之將IKKβ磷酸化，激活后的IKKβ最終導致了NF-κB(Nuclearfactor-κB)的激活。NF-κB是在1986年由Sen和Baltimore首先報道的，它是前炎癥因子基因表達調(diào)節(jié)的關(guān)鍵成分之一，它誘導前炎癥細胞因子、趨化因子、粘附分子等的表達。近十幾年來，人們對以NF-κB為核心的信號轉(zhuǎn)導系統(tǒng)有了些較為深入的了解，其激活過程和其所調(diào)控的

5、基因功能以及與人類疾病的關(guān)系也逐漸為人們所認知，但這一信號調(diào)節(jié)網(wǎng)絡還有許多方面需要做更進一步的研究。 本實驗旨在研究HSP70對LPS激活NF-κB信號通路的調(diào)節(jié)作用，為LPS急性炎癥反應的治療提供理論依據(jù)。本實驗成功克隆了HSP70以及TRAF6多種缺失變體的真核表達載體，并通過磷酸鈣共沉淀法將其轉(zhuǎn)染入HEK293細胞中研究HSP70與TRAF6的結(jié)合情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HSP70的ATPase功能域及多肽結(jié)合功能域和TRAF6的T