不同種屬AECM的成分分析、比較及組織相容性的研究.pdf

1、目的: 尋找適宜的神經(jīng)移植物橋接受損神經(jīng)干使其結(jié)構(gòu)重建和功能恢復(fù)是神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域內(nèi)多年來(lái)的研究目標(biāo)。隨著組織工程學(xué)技術(shù)的發(fā)展，同種異體脫細(xì)胞神經(jīng)移植物獲得了很好的發(fā)展，它作為有生物活性的神經(jīng)替代物，具有良好的仿生性和組織相容性，移植后為軸突再生提供適宜的微環(huán)境，能夠有效促進(jìn)神經(jīng)再生。然而，在臨床應(yīng)用中，進(jìn)行同種異體間神經(jīng)移植使供體的來(lái)源受到很大限制，異種神經(jīng)細(xì)胞外基質(zhì)材料能否作為適宜的移植物就成為亟待解決的問(wèn)題。本實(shí)驗(yàn)分析比較不同

2、種屬哺乳動(dòng)物脫細(xì)胞神經(jīng)細(xì)胞外基質(zhì)材料(AECM)的組分和免疫原性，為解決臨床周圍神經(jīng)損傷修復(fù)神經(jīng)移植物的來(lái)源問(wèn)題提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 材料與方法: 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Wistar大鼠30只，SD大鼠8只，體重為200～250g；雜種犬8只，體重約16kg，均由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供。 2、脫細(xì)胞神經(jīng)移植物的制備采用優(yōu)化的化學(xué)萃取脫細(xì)胞方法制備犬和大鼠AECM，另采用低滲-酶消化法制備大鼠AECM。 3、

3、觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法 (1)光、電鏡觀察AECM的形態(tài)結(jié)構(gòu)。 (2)變色酸2R-亮綠染色觀察AECM中殘留的髓鞘碎片，半定量分析比較脫細(xì)胞神經(jīng)移植物中髓鞘碎片含量。 (3)免疫組織化學(xué)技術(shù)使AECM中保留的成分層粘連蛋白和殘留的施萬(wàn)細(xì)胞標(biāo)志物S-100蛋白顯像，半定量分析比較脫細(xì)胞神經(jīng)移植物中各成分含量。 (4)SDS-PAGE對(duì)比觀察AECM中P0、43kDa、65kDa等蛋白條帶。 (5)通過(guò)H

4、E染色對(duì)比觀察同種異體和異種AECM埋植于皮下的免疫排斥反應(yīng)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 1、采用優(yōu)化的化學(xué)萃取脫細(xì)胞方法制備的犬、大鼠AECM和低滲-酶消化法制備的大鼠AECM均較好地保留了基底膜管結(jié)構(gòu)完整性。 2、髓鞘碎片染色強(qiáng)度在犬和大鼠AECM間無(wú)顯著性差異；在兩種脫細(xì)胞方法制備的大鼠AECM間無(wú)顯著性差異。 3、層粘連蛋白和S-100蛋白陽(yáng)性物質(zhì)的積分光密度值在犬和大鼠AECM間無(wú)顯著性差異；在兩種脫細(xì)胞方法

5、制備的大鼠AECM間無(wú)顯著性差異。 4、采用優(yōu)化的化學(xué)萃取脫細(xì)胞方法制備的犬、大鼠AECM和低滲-酶消化法制備的大鼠AECM均保留較明顯的生長(zhǎng)相關(guān)蛋白條帶，髓鞘蛋白條帶消失。 5、同種異體和異種AECM埋植后僅引起較弱的免疫排斥反應(yīng)。 結(jié)論: 1、經(jīng)脫細(xì)胞處理后，不同種屬哺乳動(dòng)物AECM均具有良好的仿生性和組織相容性。 2、采用優(yōu)化的化學(xué)萃取脫細(xì)胞方法和低滲-酶消化法制備的AECM均具有良好的仿生