納米HA-PVA多孔復(fù)合水凝膠人工角膜的組織相容性研究.pdf

1、第一部分 納米HA/PVA多孔復(fù)合水凝膠材料組織相容性的體外試驗(yàn) 目的：通過(guò)體外細(xì)胞培養(yǎng)的方法，對(duì)納米羥基磷灰石(HA)/聚乙烯醇(PVA)水凝膠多孔復(fù)合物材料的細(xì)胞毒性和生物相容性進(jìn)行評(píng)價(jià)，以了解該復(fù)合材料可否作為理想的人工角膜支架材料。 材料和方法：研究材料分為四組：大孔徑的納米HA/PVA復(fù)合水凝膠、小孔徑納米HA/PVA復(fù)合水凝膠、大孔徑的單純PVA水凝膠及小孔徑的單純PVA水凝膠，用四種材料100％及50％濃度

2、的浸漬液培養(yǎng)兔角膜成纖維細(xì)胞， 24h、48h、72h后通過(guò)MTT比色法檢測(cè)各試驗(yàn)組及空白對(duì)照組的吸光值(OD)，并計(jì)算細(xì)胞相對(duì)增值率(RGR)，對(duì)四組材料的細(xì)胞毒性進(jìn)行評(píng)分。同時(shí)通過(guò)直接接觸法，在四組材料表面培養(yǎng)兔角膜成纖維細(xì)胞，進(jìn)行熒光蛋白轉(zhuǎn)染，通過(guò)倒置顯微鏡及掃描電鏡觀察各組成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)增殖及在材料上粘附、遷移的情況。結(jié)果：各個(gè)時(shí)間點(diǎn)、不同濃度的大孔徑納米HA／PVA復(fù)合水凝膠浸漬液的細(xì)胞毒性評(píng)分均為1級(jí)，相對(duì)于其余三組材料細(xì)

3、胞增殖率高，有顯著性差異(P<0.01)。兔角膜成纖維細(xì)胞能夠在納米HA／PVA多孔復(fù)合水凝膠材料表面粘附、生長(zhǎng)繁殖，并向材料孔隙內(nèi)遷徙，其中大孔徑的復(fù)合材料比小孔徑材料更有利于細(xì)胞向孔隙內(nèi)遷徙。 結(jié)論：納米HA／PVA多孔復(fù)合水凝膠材料沒(méi)有細(xì)胞毒性，具有良好的生物相容性，有利于角膜成纖維細(xì)胞的粘附、生長(zhǎng)及增殖，是一種具有良好臨床應(yīng)用前景的新型人工角膜支架材料。第二部分納米HA／PVA多孔復(fù)合水凝膠人工角膜組織相容性的動(dòng)物試驗(yàn)

4、 目的：通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)來(lái)證實(shí)納米HA／PVA多孔復(fù)合水凝膠人工角膜具有良好的組織相容性，能減少植入后的并發(fā)癥，長(zhǎng)期穩(wěn)定地存在于宿主體內(nèi)，證實(shí)其為理想的新型人工角膜材料。 材料和方法：研究材料分為三組，材料1為大孔徑的納米HA/PVA多孔復(fù)合水凝膠人工角膜，孔徑為200um；材料2為小孔徑的納米HA／PVA多孔復(fù)合水凝膠人工角膜，孔徑為100um；材料3為單純的PVA水凝膠人工角膜，孔徑為200um。三組材料光學(xué)區(qū)域直徑為4.

5、5mm，支架部分直徑2.5mm，厚度500um，曲率半徑7.8mm。選用健康新西蘭大白兔21只，隨機(jī)分為I、Ⅱ、Ⅲ組，每組七只兔，分別板層植入材料1、2、3。通過(guò)裂隙燈觀察及組織切片HE染色、免疫組化染色觀察術(shù)后3、8、12、24周人工角膜在兔角膜內(nèi)的生物學(xué)反應(yīng)。結(jié)果：三組兔術(shù)后1周左右炎性反應(yīng)消退，3周均可見(jiàn)新生血管由角膜緣上方向下生長(zhǎng)，3-8周為生長(zhǎng)高峰期，12周趨于穩(wěn)定，以后血管變細(xì)。 I組炎性反應(yīng)輕，新生血管出現(xiàn)早，人工角膜穩(wěn)定