MAPK信號通路對p21蛋白表達調(diào)控機制的研究.pdf

1、本文研究了在p53缺失的K562細胞中JNK對p21蛋白穩(wěn)定性的調(diào)節(jié)。研究發(fā)現(xiàn)，H<,2>O<,2>能夠強烈激活JNK，而且激活所需時間只有30 min；而同樣的H<,2>O<,2>可以在隨后誘導(dǎo)胞內(nèi)p21蛋白的積累。JNK特異性抑制劑SP600125和JNK1的活性突變體JNK1(mut)在一定程度上降低了H<,2>O<,2>誘導(dǎo)的p21的蛋白量的積累。同樣被H<,2>O<,2>激活的ERK就沒有如此效應(yīng)。進一步研究發(fā)現(xiàn)在K562細胞

2、中JNK1與p21可以形成復(fù)合物，此結(jié)果與以前的研究結(jié)果相符。過表達JNK能夠提高胞內(nèi)p21的蛋白表達，而SP600125減少了內(nèi)源和過表達JNK1誘導(dǎo)的p21蛋白表達。這些結(jié)果從正反兩方面說明JNK對p21蛋白表達具有重要的調(diào)節(jié)作用。為了進一步闡明其調(diào)節(jié)機制，采用RT-PCR法研究JNK對p21轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，過表達野生型JNK不影響內(nèi)源p21的mRNA水平，而且，SP600125和JNK的活性突變體均不影響H<,2>O<,

3、2>引起的p21mRNA水平的上升。由此可以推斷，K562細胞中JNK對p21的調(diào)節(jié)發(fā)生在轉(zhuǎn)錄后水平的。隨后的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，過表達野生型JNK(而不是JNK的活性突變體)能夠延長p21蛋白的半衰期，同樣SP600125能夠減短H<,2>O<,2>引起的p21半衰期的延長。進一步的研究發(fā)現(xiàn)，JNK能夠降低內(nèi)源或轉(zhuǎn)染的p21蛋白的泛素化程度，而SP600125卻是增加了內(nèi)源p21蛋白的泛素化程度。所有這些數(shù)據(jù)均表明JNK能夠通過降低胞內(nèi)蛋白