中華絨螯蟹組蛋白H1基因的克隆及其在精巢發(fā)育中的表達(dá)特征.pdf

1、中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis)，是我國重要的經(jīng)濟(jì)蟹類之一。為了研究組蛋白H1在中華絨螯蟹非濃縮核形成中的作用及在其精子發(fā)生過程中的動態(tài)變化，本文采用PCR和RACE技術(shù)獲得了中華絨螯蟹組蛋白H1基因的全長cDNA序列。通過生物信息學(xué)方法對該基因進(jìn)行了分析，其中包括：組蛋白H1的氨基酸分析，三級結(jié)構(gòu)分析和比較，同源性分析，系統(tǒng)樹分析和基因組結(jié)構(gòu)特征分析。同時采用實時定量PCR技術(shù)分析了組蛋白H1及H1-delta在中華

2、絨螯蟹精巢發(fā)育不同時期的表達(dá)特征。
　　本研究表明：中華絨螯蟹組蛋白H1基因的全長cDNA序列為804bp，包括79 bp的5′非編碼區(qū)(5′UTR)、185 bp的3′非編碼區(qū)(3′UTR)和540bp的開放閱讀框(ORF)，共編碼179個氨基酸，所編碼多肽的相對分子量為18.28 kDa，理論等電點(diǎn)pI為10.93。此研究首次成功確定、克隆并測序了中華絨螯蟹H1基因的全長cDNA序列。對比中華絨螯蟹、家鼠和鯽魚的H1結(jié)構(gòu)域的三

3、級結(jié)構(gòu)，證明H1的結(jié)構(gòu)域在進(jìn)化上是保守的。氨基酸序列同源性分析發(fā)現(xiàn)，組蛋白H1在同一屬間的保守性很高（90％以上），但在不同屬間的保守性卻較低（50%左右），尤其是C末端結(jié)構(gòu)差異很大。實時定量PCR技術(shù)的結(jié)果顯示，H1及H1-delta在中華絨螯蟹精巢不同發(fā)育期均具有表達(dá)，且表達(dá)量均在精母細(xì)胞時期達(dá)到最大，之后逐漸下降，到精子期時下降至最低。H1在精原細(xì)胞期、精母細(xì)胞期、精細(xì)胞期的表達(dá)量與精子期相比均呈現(xiàn)出顯著差異（P<0.05），而H