基于化學(xué)探針與斑馬魚模型的中藥活性成分篩選方法研究.pdf

1、中藥藥效物質(zhì)研究是中藥現(xiàn)代化進(jìn)程重要內(nèi)容。由于中藥成分復(fù)雜，從中藥混合物中篩選發(fā)現(xiàn)藥效物質(zhì)具有一定難度。本文建立了分子水平篩選與活體篩選相結(jié)合的中藥活性成分篩選方法，著重研究了基于小分子化學(xué)探針和斑馬魚模型的3種中藥活性物質(zhì)篩選方法。
　　本論文研究內(nèi)容主要包括:
　　1.建立了一種基于聚集誘導(dǎo)發(fā)光(AIE)效應(yīng)探針的SIRT3調(diào)節(jié)劑篩選方法。設(shè)計了基于AIE效應(yīng)的小分子探針，由一個作為熒光發(fā)色基團(tuán)的四苯基乙烯(TPE)，與

2、SIRT3酶能夠識別的底物多肽Gln-Lys(Ac)-Arg-Phe-Asn通過固相合成得到。通過對體外反應(yīng)體系的pH、緩沖鹽濃度、探針濃度等因素的優(yōu)化，該探針能夠在體外特異性檢測SIRT3活性，并具有較低的檢測限。有望用于中藥中SIRT3調(diào)節(jié)劑篩選。
　　2.建立了一種基于花生四烯酸誘導(dǎo)斑馬魚血栓模型的中藥活性物質(zhì)篩選方法，并用于丹紅注射液活性成分篩選與質(zhì)量評價。采用鄰聯(lián)茴香胺對斑馬魚心臟與尾部紅細(xì)胞染色并獲取血栓的顯微圖像，以

3、心臟紅細(xì)胞強(qiáng)度為指標(biāo)評價血栓形成情況。結(jié)果表明，該模型能夠較準(zhǔn)確地評價陽性藥阿司匹林的抗血栓活性。運(yùn)用該方法評價了丹紅注射液的抗血栓活性，發(fā)現(xiàn)丹紅注射液能劑量依賴性地減輕花生四烯酸誘導(dǎo)的斑馬魚血栓，丹參與紅花提取物也有較好抗血栓活性。篩選出丹紅注射液中迷迭香酸、對香豆酸等抗血栓活性成分，進(jìn)一步結(jié)合對丹紅注射液中化合物含量分析，發(fā)現(xiàn)迷迭香酸和對香豆酸可作為丹紅注射液抗血栓活性相關(guān)質(zhì)量標(biāo)志物。并且該方法有望用于批次一致性評價。
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4、.建立了一種基于化學(xué)探針與斑馬魚血瘀血虛模型相結(jié)合的中藥活性多重評價方法。對綠色熒光蛋白(GFP)標(biāo)記血紅蛋白的轉(zhuǎn)基因斑馬魚用苯肼?lián)p傷，通過熒光成像獲取血液流動情況來定性表征血瘀血虛證型。采用小分子探針NP3特異性地原位檢測斑馬魚體內(nèi)過氧化亞硝酸鹽ONOO-，以探針熒光強(qiáng)度來描述斑馬魚氧化應(yīng)激損傷和炎癥程度，通過流式細(xì)胞術(shù)檢測GFP標(biāo)記的紅細(xì)胞強(qiáng)度并以此為指標(biāo)來評價血瘀血虛情況，實現(xiàn)了雙重活性指標(biāo)檢測。運(yùn)用該方法評價了丹紅注射液及丹參、