耐莫匹羅星——甲氧西林金葡菌的流行及金葡菌消毒劑耐受性.pdf

1、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus),尤其是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(meticillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)仍然是人類(lèi)醫(yī)院感染常見(jiàn)的病原菌。該菌可導(dǎo)致多種臨床狀況,范圍從無(wú)癥狀的定植到嚴(yán)重的侵入性感染不一而足。S.aureus感染的致病機(jī)制與其能產(chǎn)生多種毒力因子有關(guān)。無(wú)癥狀定植于健康人體是S.aureus的一個(gè)基本生物學(xué)特性,且鼻孔是其最

2、常定植的場(chǎng)所。S.aureus的這種定植具有高度的危險(xiǎn)性,被認(rèn)為是該菌在人群中感染和傳播的重要傳染源。莫匹羅星是治療S.aureus(尤其是MRSA)皮膚、軟組織感染及清除該菌鼻孔定植比較有效的抗菌藥物。但隨著該藥的廣泛使用,其耐藥性也在世界范圍內(nèi)快速出現(xiàn)了。為了合理有效的使用莫匹羅星,我們對(duì)上海和溫州地區(qū)莫匹羅星耐藥MRSA的流行進(jìn)行了研究,同時(shí)對(duì)耐藥菌株毒力基因的攜帶情況也進(jìn)行了調(diào)查,以了解該類(lèi)菌株致病機(jī)制的特點(diǎn)。消毒劑是阻斷S.a

3、ureus傳播途徑和預(yù)防感染的感染控制措施之一,但當(dāng)前消毒劑耐受S.aureus在世界各地已有報(bào)道。所以S.aureus對(duì)醫(yī)院常用消毒劑的敏感性也是本研究的內(nèi)容之一。
　　 一.耐莫匹羅星-甲氧西林金黃色葡萄球菌的流行
　　 目的:了解MRSA臨床分離株對(duì)莫匹羅星的耐藥程度,分析耐藥菌株的分子流行病學(xué)特征。方法:收集上海和溫州5所醫(yī)院臨床各科室分離的MRSA803株,紙片擴(kuò)散法檢測(cè)其莫匹羅星的耐藥性；最小抑菌濃度(min

4、imal inhibitory concentration,MIC,瓊脂稀釋法)檢測(cè)和多聚酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)確定耐藥菌株的耐藥水平,質(zhì)粒DNA雜交和消除實(shí)驗(yàn)研究莫匹羅星耐藥基因(mupA)的定位情況；紙片擴(kuò)散法檢測(cè)耐藥菌株對(duì)10種抗菌藥物的敏感性；脈沖場(chǎng)凝膠電泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)、葡萄球菌染色體盒mec(staphylococ

5、cal chromosomal cassette mec,SCCmec)、葡萄球菌A蛋白(staphylococcal protein A,spa)和多位點(diǎn)序列分型(multilocus sequencetyping,MLST)等方法分析耐藥菌株分子流行病學(xué)特征。結(jié)果:53株(6.6％,53/803)MRSA為莫匹羅星耐藥,且全部為高水平莫匹羅星耐藥并攜帶mupA基因。Southern雜交和質(zhì)粒消除實(shí)驗(yàn)顯示,mupA定位于分子量在23.

6、0 kb和52.4 kb之間的一個(gè)大質(zhì)粒上?？咕幬锩舾袑?shí)驗(yàn)顯示,上海菌株與溫州菌株對(duì)復(fù)方新諾明和利福平的耐藥性差別具有顯著性。分子分型結(jié)果顯示,PFGE A-SCCmecⅢA-spa t030-ST239和PFGEB-SCCmecⅢA-spa t030-ST239是溫州菌株的主要型別,PFGE N-SCCmecⅠ-spa t318-ST284、PFGE P-SCCmecⅢ-spa t037-ST239、PFGEⅠ-SCCmecⅢ-sp

7、a t037-ST239和PFGE M-SCCmecⅢA-spa t002-ST5是上海菌株最主要的型別。結(jié)論:上海和溫州地區(qū)臨床分離的MRSA中有質(zhì)粒介導(dǎo)的高水平莫匹羅星耐藥流行,這種流行主要與克隆傳播有關(guān)。
　　 二.高水平莫匹羅星耐藥MRSA(MuH MRSA)菌株的毒力特征
　　 目的:了解上海和溫州地區(qū)臨床分離MuH MRSA菌株的毒力特征。
　　 方法:PCR擴(kuò)增53株MuH MRSA(上海菌株28株

8、、溫州菌株25株)的35個(gè)毒力基因及對(duì)菌株進(jìn)行agr分型；分光光度計(jì)生物膜測(cè)定法檢測(cè)各菌株形成生物膜的能力。結(jié)果:最常見(jiàn)的毒素基因?yàn)閔la(98.1％),其次為hlg(86.8％)、hlb(81.1％)、sea(54.7％)、seg(37.7％)、sei(28.3％)、tst(26.4％)、sec(22.6％)、hlg(17.0％)和pvl(15.1％),其中sec、sei、tst和pvl基因僅存在于上海菌株中。攜帶sej基因的菌株較為

9、少見(jiàn),沒(méi)有菌株攜帶seb、sed、see、seh、eta、etb和hld基因。與溫州菌株相比,上海菌株sea的陽(yáng)性率明顯偏低(p<0.001),但其seg的陽(yáng)性率顯著偏高(p=0.002)；53株MuH MRSA中,有75.0％以上的菌株攜帶fnbA、clfA、clfB、ebpS、map和cap8粘附相關(guān)基因。fnbB和cna基因存在于28.6％和67.9％的上海菌株中,而4.0％和92.0％的溫州菌株攜帶這兩種基因,且差異具有顯著性。

10、未發(fā)現(xiàn)cap5陽(yáng)性的菌株；其他毒力因子檢測(cè)顯示,efb、sbi、ssp、sak、icaA和sarA基因存在于大部分菌株中,其中efb基因在溫州菌株中的流行更勝于上海菌株(p=0.045)。所有菌株都為icaD陽(yáng)性及ACEM-arcA陰性；agr分型結(jié)果顯示,71.7％的菌株為agrⅠ型,沒(méi)有發(fā)現(xiàn)agrⅣ型菌株。生物膜形成定量檢測(cè)顯示,生物膜形成陽(yáng)性菌株的比率不高。菌株毒力基因譜分析顯示,在上海菌株中,最常見(jiàn)的毒素基因組合是sec+seg

11、+sei+tst+hla+hlb+hlg+pvl(21.4％,6/28)；其次為sea+hla+hlb+hlg(17.9％,5/28),該組合也是溫州菌株中最主要的組合(68.0％,17/25)。53.6％(15/28)的上海菌株擁有高毒素基因含量(≥5毒素基因),但僅12.0％(3/25)的溫州菌株含有5個(gè)毒素基因。不過(guò),大部分上海菌株和溫州菌株具有相同或相似的高毒力基因含量的粘附基因和其它毒力基因譜。結(jié)論:上海菌株攜帶的毒素基因多于

12、溫州菌株,可能具有更強(qiáng)的毒素毒力。
　　 三.金黃色葡萄球菌消毒劑耐受性研究
　　 目的:探討臨床分離的季銨鹽復(fù)合物(quaternary ammoniumcompounds,QACs)耐受S.aureus對(duì)5種消毒劑(苯雜氯銨、戊二醛、次氯酸鈉、碘伏和乙醇)的敏感性及QACs耐藥基因在該類(lèi)菌株中的流行。方法:篩選并收集溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院分離的QACs耐受臨床S.aureus菌株,二倍稀釋法檢測(cè)其在分別暴露于5種消毒

13、劑5 min、30min、180 min時(shí)的最小殺菌濃度(minimal bactericidal concentrations,MBCs)；PCR法檢測(cè)qacA/B、smr、qacH和qacG基因在該類(lèi)菌株中的分布。結(jié)果:56株S.aureus為QACs耐受菌株；當(dāng)其暴露于苯雜氯銨和碘伏5 min時(shí),分別有7.1％(4/56)和7.1％(4/56)菌株的MBC值高于其消毒粘膜和傷口的使用濃度。所有菌株在3個(gè)作用時(shí)間對(duì)戊二醛、次氯酸鈉和