脯氨酸羥化酶2參與糖尿病視網(wǎng)膜病變的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　觀察脯氨酸羥化酶2(prolyl hydroxylase domain2，PHD2)在糖尿病視網(wǎng)膜病變動(dòng)物模型中的表達(dá)情況，探討PHD2在糖尿病視網(wǎng)病變中的可能作用機(jī)制，揭示糖尿病視網(wǎng)膜病變治療的新靶點(diǎn)。
　　方法：
　?。?）早期糖尿病動(dòng)物模型的制作：采用0.001mmol/L檸檬酸鹽緩沖液配成10g/L的鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)，實(shí)驗(yàn)組大鼠45只，對(duì)照15只，按60 mg/kg

2、劑量左下腹腔內(nèi)注射，72h后取大鼠尾血測(cè)血糖。將血糖≥16.7mmol/L的大鼠確定為糖尿病大鼠的模型，對(duì)照組腹腔注射檸檬酸鹽緩沖液。
　　（2）建模成功的糖尿病大鼠定期檢測(cè)血糖和測(cè)量體重，并記錄。建立模型2個(gè)月后對(duì)眼部標(biāo)本進(jìn)行病理切片，行蘇木精-伊紅染色(hematoxylin-eosin staining,HE)及免疫熒光化學(xué)染色，觀察大鼠視網(wǎng)膜組織的病理改變及PHD2、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary ac

3、idic protein,GFAP)及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)等因子在視網(wǎng)膜組織中的分布與表達(dá)情況，觀察PHD2主要表達(dá)于何種視網(wǎng)膜組織細(xì)胞，分析PHD2與其他血管增生因子的相關(guān)關(guān)系。
　?。?）早期糖尿病大鼠眼內(nèi)因子mRNA表達(dá)檢測(cè):應(yīng)用RT-PCR方法檢測(cè)PHD2、VEGF、GFAP等因子mRNA在眼內(nèi)的表達(dá)情況。
　　結(jié)果
　?。?）糖尿病

4、大鼠的體重隨時(shí)間推移先增后減，血糖始終維持在高水平，與對(duì)照組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.01）
　?。?）視網(wǎng)膜組織病理學(xué)檢查 HE染色結(jié)果：光鏡下正常對(duì)照組大鼠可見視網(wǎng)膜組織表面光滑，各層結(jié)構(gòu)清晰完整，細(xì)胞排列整齊。與對(duì)照組相比，糖尿病大鼠組視網(wǎng)膜各層開始變薄，排列紊亂，部分血管呈擴(kuò)張趨勢(shì)，并可見色素上皮細(xì)胞增生。
　?。?）免疫熒光染色：在正常大鼠視網(wǎng)膜中，PHD2不表達(dá)，GFAP及VEGF主要在星形膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)，其余

5、各層組織不表達(dá)；但在早期糖尿病大鼠視網(wǎng)膜全層中可見 PHD2、GFAP及VEGF染色均為強(qiáng)陽(yáng)性，以神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)為主，PHD2與VEGF和GFAP共表達(dá)。
　?。?）實(shí)驗(yàn)組PHD2、GFAP及VEGF mRNA表達(dá)水平較正常對(duì)照組明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.01）。
　　結(jié)論：
　　早期糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中PHD2高表達(dá)可能由局部高濃度血糖誘導(dǎo)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞分泌產(chǎn)生，進(jìn)而促進(jìn)VEGF、GFAP的表達(dá)增高，PHD2