左歸丸對(duì)血管生成體外三維模型的影響及其與卵巢PLGF、Flt-1的關(guān)系.pdf

1、目的：觀察高效液相色譜（High performance liquid chromatography，HPLC）監(jiān)測(cè)制備的左歸丸含藥血清對(duì)血管生成體外三維模型及左歸丸對(duì)雷公藤多苷致卵巢功能低下大鼠卵巢胎盤生長(zhǎng)因子（Placenta growth factor，PLGF）及酪氨酸激酶（Fms-like tyrosine kinase，F(xiàn)lt-1）表達(dá)的影響，探討左歸丸促進(jìn)血管生成的作用機(jī)制。
　　方法：
　?。?）將45只SD

2、（Sprague-Dawley）雌性大鼠，220±20g，分為大鼠空白血清組（蒸餾水11g/kg），左歸丸浸膏低劑量組（11g/kg）、左歸丸浸膏高劑量組（33g/kg）灌胃一次后，于不同時(shí)間點(diǎn)采血，制備左歸丸含藥血清；HPLC監(jiān)測(cè)下選取藥物成分峰值最大時(shí)間點(diǎn)的含藥血清進(jìn)行人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（Human umbilical vein endothelial cells，HUVEC）體外三維培養(yǎng)；四甲基偶氮唑藍(lán)（Methyl thiaz

3、olyl tetrazolium，MTT）比色法觀察左歸丸含藥血清對(duì)HUVEC增殖的影響，I型鼠尾膠原表面培養(yǎng)法建立HUVEC血管生成三維模型。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測(cè)大鼠血清雌二醇（estradiol，E2）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）水平。
　?。?）將40只SD雌性大鼠180±

4、20g，分為空白組（8只）和模型組（32只），模型組予雷公藤多苷片懸浮液50mg/kg灌胃，持續(xù)14天，制作卵巢功能低下大鼠模型，造模成功的大鼠隨機(jī)分為模型組（蒸餾水20g/kg）、倍美力組（65ug/kg）、左歸丸低劑量組（11g/kg）、左歸丸高劑量組（33g/kg），灌胃20天，觀察各組大鼠動(dòng)情周期變化，計(jì)算卵巢、子宮指數(shù)，蘇木精-伊紅（Hematoxylin and eosin，HE）染色觀察卵巢組織形態(tài)，免疫組化法及蛋白印跡法

5、（Western blot，WB檢測(cè)大鼠卵巢組織PLGF及其受體Flt-1的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　?。?）左歸丸灌胃后2小時(shí)達(dá)最高藥物吸收峰值。左歸丸浸膏低劑量組（72h），高劑量組（24h、48h、72h）對(duì)HUVEC均有增殖作用（P＜0.05或P＜0.01）。左歸丸低、高劑量組可增加內(nèi)皮小管的面積、長(zhǎng)度、管徑及生成指數(shù)（P＜0.01），可明顯提高大鼠血清E2、VEGF水平（P＜0.05或P＜0.01）。
　?。?/p>

6、2）卵巢功能低下大鼠動(dòng)情周期紊亂延長(zhǎng)，治療后大鼠動(dòng)情周期逐漸恢復(fù)至正常。與模型組相比，各治療組的卵巢、子宮指數(shù)增高（P＜0.05或P＜0.01），各級(jí)生長(zhǎng)卵泡、黃體及卵巢血管數(shù)增多（P＜0.05或P＜0.01），閉鎖卵泡數(shù)量減少（P＜0.05或P＜0.01）。各治療組PLGF、Flt-1累積光密度值及蛋白表達(dá)量增高（P＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　（1）HPLC監(jiān)測(cè)制備的左歸丸含藥血清可以促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，改善三維小