人參皂苷Rb1抗血管平滑肌細(xì)胞增殖及球囊損傷所致頸動(dòng)脈內(nèi)膜增生的研究.pdf

1、第一部分
　　 目的：研究人參皂苷Rb1（ginsenosideRb1，Rb1）對(duì)血小板源性生長(zhǎng)因子BB(PDGF-BB)所致血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)增殖及細(xì)胞周期的影響并探討其可能的機(jī)制。
　　 方法：采用組織塊貼壁法培養(yǎng)SD大鼠胸主動(dòng)脈VSMC，MTT比色法觀察Rb1（25μg/ml、50μg/ml、lOOμg/ml）對(duì)PDGF-BB（25ng/ml）所誘導(dǎo)的VSMC增殖的影響，并用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞增殖周期；一氧

2、化氮(NO)測(cè)試盒測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中NO含量；Real-timeRT-PCR檢測(cè)VSMC中周期蛋白A(CyclinA)、周期蛋白E(CyclinE)、周期蛋白依賴(lài)性蛋白激酶2（CDK2）、鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果：在正常細(xì)胞中加入高濃度Rb1（1OOμg/ml）不影響VSMC的光密度值，也不改變G0/G1期、G2/M期和S期細(xì)胞比例（P>

3、0．05）；而加入PDGF-BB則使細(xì)胞的光密度值明顯升高（P

4、SMC在MTT測(cè)定中由PDGF-BB誘導(dǎo)的光密度值的升高，降低細(xì)胞周期中S期細(xì)胞，而升高G0/G1期細(xì)胞比例，顯著下調(diào)PDGF-BB所升高的CyclinA、CyclinE、CDK2、CaNmRNA表達(dá)；此外，1OOμg/mlRbi可下調(diào)iNOSmRNA而上調(diào)eNOSmRNA表達(dá)，上清液NO含量不變；中低濃度Rbi使iNOSmRNA表達(dá)趨于降低，eNOSmRNA表達(dá)趨于增高，但能升高VSMCs上清液中NO含量。
　　 結(jié)論：Rb1

5、能抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的VSMC增殖，該作用可能是通過(guò)下調(diào)CyclinA、CyclinE、CDK2mRNA表達(dá)而阻礙Go/Gi期向S期過(guò)渡所致。Rbi下調(diào)CaNmRNA表達(dá)可能是其抗增殖作用的分子機(jī)制之一，中、低濃度Rbi的抗增殖作用還可能與其促進(jìn)NO釋放有關(guān)。
　　 第二部分
　　 目的：研究人參皂苷Rb1(GinsenosideRb1，Rb1)對(duì)球囊損傷所致大鼠頸總動(dòng)脈內(nèi)膜增生的影響并探討其可能的作用機(jī)制。

6、　　 方法：建立大鼠頸總動(dòng)脈內(nèi)膜球囊損傷所致增生模型；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為假手術(shù)組(Sham組)、模型組(Model組)、Rbl低(10mg/kg/d，Rb1-L)、高(30mg/kg/d，Rb1-H)劑量組，制模后次日腹腔注射給藥，連續(xù)給藥14天(Model組與Sham組給予等體積生理鹽水)后取損傷側(cè)頸總動(dòng)脈行H.E.染色，計(jì)算其內(nèi)膜面積(NIA)及內(nèi)膜面積／中膜面積(NIA/MA)以評(píng)價(jià)新生內(nèi)膜增生程度，并觀察增殖細(xì)胞核抗原(prolif

7、eratingcellnuclearantigen，PCNA)陽(yáng)性表達(dá)率來(lái)判斷內(nèi)膜增生與細(xì)胞增殖的關(guān)系；采用羥胺法、比色法和免疫酶聯(lián)吸附試驗(yàn)(Elisa)分別檢測(cè)大鼠血漿中超氧化物歧化酶(SOD)的活力，丙二醛(MDA)含量和環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷(cGMP)的含量：實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time-PCR)檢測(cè)頸總動(dòng)脈血管壁中原癌基因c-mycmRNA，平滑肌α-肌動(dòng)蛋白(SMa-actin)mRNA，胚胎型肌球蛋白重鏈(embryoruc

8、smoothmusclemyosinheavychain，SM-emb)，p38mRNA的表達(dá)；免疫組織化學(xué)法檢測(cè)PCNA、SMa-actin和磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2(extracellularsignal-regulatedkinasel/2，ERKl/2)蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：與Sham組比較，Model組大鼠頸動(dòng)脈管腔明顯狹窄、內(nèi)膜顯著增厚、PCNA陽(yáng)性表達(dá)率明顯升高（P<0.01）。Rb1的兩個(gè)劑量給藥均使球

9、囊損傷所致頸動(dòng)脈管腔狹窄程度顯著減輕，頸動(dòng)脈NIA、NIA/MA明顯減?。≒<0．O1），并使PCNA陽(yáng)性表達(dá)率顯著下降(P<0.01)；球囊損傷還使大鼠血漿SOD活力及cGMP含量降低，MDA含量增高，而Rbi則明顯升高血漿SOD活力和cGMP含量(P

10、.05)，但對(duì)p38mRNA的表達(dá)影響不明顯(P>0.05)。此外，Rb1還可下調(diào)SM-embmRNA表達(dá)（P<0．O1），高劑量上調(diào)SMa-actinmRNA及蛋白的表達(dá)（P<0.05）。
　　 結(jié)論：(1)Rb1具有明顯的抑制球囊損傷所致血管內(nèi)膜異常增生的作用，可能主要是通過(guò)抑制VSMC的移行、增殖而起作用；(2)Rb1抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，升高cGMP含量可能參與其抗VSMC增殖的作用；(3)Rb1的抗VSMC增殖作用可能與