人參皂苷Rb1抑制自體靜脈移植物內(nèi)膜平滑肌細(xì)胞增生的研究.pdf

1、背景與目的：
　　 冠脈動(dòng)脈旁路移植術(shù)是治療冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(CoronaryAtherosclerotic Heart Disease,簡(jiǎn)稱冠心病)的主要方法之一,自從Favaloro首次將大隱靜脈應(yīng)用于冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)以來,大隱靜脈由于具有來源豐富,口徑較大,易于吻合,取材容易且長(zhǎng)度充分等特點(diǎn),成為臨床上主要的移植材料。但種種原因造成的移植靜脈再狹窄或閉塞,使移植血管橋的使用壽命受到了一定的限制,遠(yuǎn)期療效并不理想。

2、一般來說遠(yuǎn)期通暢率1年約為80％,5年約為75%,以后每年的閉塞率為2-4%,10年約為50%,所以有一部分人需要接受二次手術(shù)。預(yù)防移植靜脈再狹窄或閉塞成為了研究熱點(diǎn)。人參皂苷Rb1是從人參中提取的單體化合物,是一種鈣通道阻滯劑,有明顯的阻滯ICa2+電流的作用,并且能明顯抑制MCT(野百合堿)誘導(dǎo)的RVH(右心室肥大),具有抗心律失常的作用,還具有顯著的抗血管內(nèi)皮缺氧損傷、抗氧自由基等作用,有報(bào)道稱:人參皂苷Rb1可通過減少內(nèi)膜增生過

3、程中增殖細(xì)胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,簡(jiǎn)稱PCNA)及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TransformingGrowth Factor-β,簡(jiǎn)稱TGF-β)的基因表達(dá)進(jìn)而抑制血管平滑肌細(xì)胞(vascularsmooth muscle cells,簡(jiǎn)稱VSMCs)的過度增殖,減少細(xì)胞外基質(zhì)的形成和分泌,起到抑制內(nèi)膜過度增生、減輕移植血管再狹窄的作用,延長(zhǎng)移植靜脈的使用壽命。本實(shí)驗(yàn)在建立兔頸外靜脈.頸

4、總動(dòng)脈移植血管橋動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上,通過腹腔注射一定劑量的人參皂苷Rb1成品,觀察各組移植靜脈內(nèi)膜厚度和形態(tài)的變化以及PCNA與TGF-β基因表達(dá)的變化,探討人參皂苷Rb1對(duì)移植靜脈橋再狹窄或閉塞的抑制作用及其作用機(jī)理,為以后的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　 材料與方法：
　　 45只健康純種新西蘭大白兔,雌雄不限,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組、模型組、對(duì)照組3組,每組15只。應(yīng)用"no-touch"外科技術(shù)獲取右側(cè)頸外靜脈后,

5、離斷右側(cè)頸總動(dòng)脈,采用外翻連續(xù)縫合方法端端吻合頸外靜脈和頸總動(dòng)脈,建立頸外靜脈和頸總動(dòng)脈旁路移植的動(dòng)物模型。4周后,取出移植靜脈血管,利用HE染色觀察移植靜脈血管內(nèi)膜形態(tài)和厚度變化,并測(cè)量?jī)?nèi)膜厚度,計(jì)算內(nèi)膜/中膜的厚度比,免疫組化觀察靜脈移植血管增殖細(xì)胞核抗原與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β陽性表達(dá)情況,RT-PCR檢測(cè)移植靜脈血管中PCNA及TGF-βmRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1移植靜脈HE染色結(jié)果
　　 石蠟切

6、片HE染色光鏡下觀察分析結(jié)果顯示:移植4周后實(shí)驗(yàn)組、模型組的移植靜脈內(nèi)膜均有不同程度的增生重構(gòu),模型組更顯著,實(shí)驗(yàn)組、模型組、對(duì)照組移植血管的內(nèi)膜厚度分別為(41.57±2.43)μm、(73.76±7.83)μm、(11.38±0.71)μm,各組間比較P＜0.05,有顯著差異。三組移植靜脈內(nèi)膜/中膜厚度比分別為(1.21±0.09)、(1.44±0.12)、(0.28±0.07),各組間比較P＜0.05,有顯著差異。
　　

7、2移植靜脈免疫組化染色結(jié)果觀察
　　 移植4周后實(shí)驗(yàn)組、模型組、對(duì)照組的移植靜脈內(nèi)膜中均可見到PCNA、TGF-β陽性細(xì)胞表達(dá)。實(shí)驗(yàn)組、模型組、對(duì)照組PCNA陽性表達(dá)指數(shù)分別是(35.24±2.31)%、(57.84±2.79)%、(14.37±1.20)%,各組間比較P＜0.05;有顯著差異;移植4周后實(shí)驗(yàn)組、模型組、對(duì)照組TGF-β陽性表達(dá)指數(shù)分別是(30.28±1.69)%、(52.43±3.85)%、(13.57±1.1

8、3)%,各組問比較P＜0.05,有明顯差異。
　　 3移植靜脈RT-PCR結(jié)果觀察
　　 RT-PCR結(jié)果顯示各組移植靜脈血管中均可見PCNA及TGF-βmRNA表達(dá),但經(jīng)人參皂苷Rb1干預(yù)后,模型組PCNA及TGF-βmRNA相對(duì)表達(dá)含量明顯高于實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,以目的基因與內(nèi)參基因的積分光密度比值計(jì)算PCNA及TGF-β的相對(duì)含量;移植4周后的實(shí)驗(yàn)組、模型組、對(duì)照組PCNAmRNA相對(duì)含量比值分別是(0.942±0.0

9、04)、(0.756±0.003)、(0.574±0.002),各組間比較P＜0.05,有顯著差異;TGF-βmRNA的相對(duì)含量比值分別是(0.921±0.006)、(0.716±0.003)、(0.539±0.004),各組間比較P＜0.05,有顯著差異。
　　 4相關(guān)性分析結(jié)果
　　 SPSS簡(jiǎn)單線性模型結(jié)果顯示:
　　 (1)PCNA與移植靜脈再狹窄呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)為0.402。
　　 (2)TG