復(fù)方柴歸方抗抑郁藥效研究.pdf

1、選題依據(jù)：抑郁癥是一種心境障礙，常伴發(fā)有多種心理癥狀群和軀體癥狀群，有著嚴(yán)重的危害性，全球疾病負(fù)擔(dān)調(diào)查結(jié)果顯示，抑郁癥造成的健康壽命損失位居所有病種的第二位，而且重度抑郁癥患者還有自殺傾向和行為?，F(xiàn)有的抗抑郁藥物以西藥為主，但存在著有效率低、副反應(yīng)大、作用譜窄等不足，而且機制單一，對伴發(fā)癥狀沒有很好的改善。近年來國內(nèi)研究人員將目光轉(zhuǎn)移到傳統(tǒng)中藥復(fù)方上，中藥在抑郁癥治療上有豐富的臨床經(jīng)驗，而且在抑郁癥伴發(fā)的胃腸功能紊亂、認(rèn)知功能障礙、性功

2、能障礙、睡眠障礙等的調(diào)節(jié)上具有優(yōu)勢，且不良反應(yīng)較少，其多成分的復(fù)雜性，同時也是多靶點、多途徑、多系統(tǒng)協(xié)同發(fā)揮作用的優(yōu)點。課題組前期研究證實了古方逍遙散具有顯著的抗抑郁作用，并經(jīng)系統(tǒng)研究，獲得到了具有確切抗抑郁作用的裁減方——復(fù)方柴歸方。本課題在確定了復(fù)方柴歸方最佳提取工藝的基礎(chǔ)上，以該方中試提取物為受試藥物，進(jìn)行安全性、藥效及藥效特點的全面研究。
　　目的：明確復(fù)方柴歸方提取物的初步安全性；篩選出復(fù)方柴歸方抗抑郁有效劑量的范圍；明

3、確該方提取物對哪些抑郁癥動物模型具有確切的藥效；發(fā)現(xiàn)該方的抗抑郁藥效特點；采用代謝組學(xué)技術(shù)從內(nèi)源性代謝物的角度對其抗抑郁藥效和作用機制進(jìn)行評價。
　　內(nèi)容與方法：
　　1.按照《藥物單次給藥毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》，采用雌、雄各半的ICR小鼠40只進(jìn)行復(fù)方柴歸方單次給藥毒性預(yù)實驗，以小鼠的死亡數(shù)或體重作為指標(biāo)，得出各組小鼠在最大給藥量下沒有出現(xiàn)死亡且體重正常增長；依據(jù)預(yù)實驗結(jié)果，采用雌、雄各半的ICR小鼠40進(jìn)行復(fù)方柴歸方最大

4、耐受量試驗，以小鼠的體重和反映肝腎功能的血液生化作為指標(biāo)；依據(jù)前期研究結(jié)果和逍遙丸（濃縮）的臨床使用，設(shè)計多個劑量組，采用小鼠懸尾實驗（TST）和小鼠強迫游泳實驗（FST）進(jìn)行抗抑郁有效劑量的篩選；
　　2.采用TS T、FS T、CUMS和利血平誘導(dǎo)4種模型，對復(fù)方柴歸方的抗抑郁藥效進(jìn)行評價；
　　3.在CUMS模型的基礎(chǔ)上，采用水迷宮實驗考察復(fù)方柴歸方對CUMS大鼠伴發(fā)的認(rèn)知功能障礙的改善作用，采用高架十字迷宮實驗考察復(fù)

5、方柴歸方對CUMS大鼠伴發(fā)的焦慮情緒的改善作用，采用糞便數(shù)量和性狀評分等指標(biāo)考察復(fù)方柴歸方對CUMS大鼠伴發(fā)的糞便性狀異常的改善作用；
　　4.采用1H-NMR檢測方法，應(yīng)用代謝組學(xué)技術(shù)分析大鼠血清代謝產(chǎn)物，對復(fù)方柴歸方的藥效進(jìn)行驗證。
　　結(jié)果：
　　1.經(jīng)梯度溶解試驗得出復(fù)方柴歸方最大濃度為0.8 g/ml，用復(fù)方柴歸方最大濃度和小鼠最大灌胃體積40 ml/k g給予ICR小鼠7天，實驗期間小鼠沒有死亡，體重正常增

6、長，得出復(fù)方柴歸方的最大給藥量是140 g/k g。依據(jù)預(yù)實驗結(jié)果進(jìn)行最大耐受量試驗，兩次給予小鼠最大給藥量，間隔6 h，觀察14天，期間小鼠沒有死亡，體重正常增長，得出復(fù)方柴歸方的最大耐受量大于280 g/k g。
　　2.小鼠懸尾實驗和小鼠強迫游泳實驗結(jié)果表明，復(fù)方柴歸方在生藥量為7g/k g時開始起效，在生藥量為14 g/k g和28 g/k g時顯著有效，逍遙丸（濃縮）臨床用量的等效劑量（1.35 g/k g）與空白組無顯

7、著性差異，說明逍遙丸在目前的臨床用量下無法起到抗抑郁作用，需加大服用量。
　　3. FST、TS T、利血平誘導(dǎo)的小鼠抑郁模型和C UMS模型的試驗結(jié)果表明，復(fù)方柴歸方各劑量組可以顯著降低FST和 TS T模型小鼠的不動時間；可以顯著（P<0.01或P<0.05）改善CUMS模型大鼠的抑郁行為；可以顯著改善利血平誘導(dǎo)的體溫降低和眼瞼下垂等癥狀。各個模型的藥效學(xué)試驗結(jié)果顯示，復(fù)方柴歸方具有顯著的抗抑郁作用。
　　4.基于CUM

8、S模型的復(fù)方柴歸方藥效特點研究實驗結(jié)果顯示，CUMS模型大鼠伴發(fā)有焦慮情緒、認(rèn)知功能障礙和糞便性狀異常等癥狀。復(fù)方柴歸方各劑量組、文拉法辛以及復(fù)方柴歸方與文拉法辛聯(lián)用可以顯著增加大鼠的直立次數(shù)、探頭次數(shù)、開放臂活動時間。復(fù)方柴歸方各劑量組以及復(fù)方柴歸方與文拉法辛聯(lián)用可以顯著縮短大鼠潛伏期，顯著增加大鼠的穿越平臺次數(shù)以目標(biāo)象限活動時間，而文拉法辛組與模型對照無顯著性差異，但是可以顯著提高大鼠的游泳速度。復(fù)方柴歸方各劑量組大鼠體重均高于文拉

9、法辛組，表明復(fù)方柴歸方對 CUMS大鼠胃腸功能有較好的調(diào)節(jié)作用，復(fù)方柴歸方各高、中劑量組以及復(fù)方柴歸方與文拉法辛聯(lián)用可以顯著減少大鼠糞便數(shù)量，調(diào)節(jié)大鼠糞便含水量到空白組水平，文拉法辛組和復(fù)方柴歸方低劑量組在造模第21 d和28 d糞便含水量顯著下降。
　　5.基于1H-NMR代謝組學(xué)分析結(jié)果顯示，與空白對照組相比模型對照組大鼠血清中N-乙酰糖蛋白、膽堿、葡萄糖含量顯著升高，異亮氨酸、氧化三甲胺、肌酸含量顯著降低。復(fù)方柴歸方各劑量組

10、以及文拉法辛均可以調(diào)節(jié)這6個差異代謝物接近正常水平。
　　結(jié)論：實驗結(jié)果表明復(fù)方柴歸方小鼠最大耐受量大于280 g/k g（生藥量），安全性較高；篩選出復(fù)方柴歸方抗抑郁起效劑量為7 g/k g（生藥量），在14和28 g/kg（生藥量）時藥效顯著；多種抑郁模型試驗結(jié)果表明復(fù)方柴歸方具有顯著的抗抑郁作用；復(fù)方柴歸方各劑量和文拉法辛對 CUMS模型大鼠伴發(fā)的焦慮情緒有顯著的改善作用；復(fù)方柴歸方各劑量組以及復(fù)方柴歸方中劑量與文拉法辛聯(lián)用

11、可以顯著改善 CUMS模型大鼠伴發(fā)的認(rèn)知功能障礙，而文拉法辛對這一癥狀沒有改善作用；復(fù)方柴歸方中、高劑量以及復(fù)方柴歸方與文拉法辛聯(lián)用可以顯著降低大鼠的排便數(shù)目，調(diào)節(jié)大鼠糞便含水量趨近于空白組水平，而文拉法辛雖然可以降低大鼠的排便數(shù)量，但是對于含水量有過調(diào)節(jié)，這一結(jié)果與臨床上文拉法辛導(dǎo)致便秘的副作用一致，復(fù)方柴歸方各劑量組大鼠體重均高于文拉法辛組，表明復(fù)方柴歸方對 CUMS大鼠胃腸功能有較好的調(diào)節(jié)作用；代謝組學(xué)結(jié)果表明， CUMS造模成功