同步雙脈沖胃電刺激對(duì)迷走神經(jīng)離斷大鼠胃動(dòng)力的影響及其信號(hào)機(jī)制的研究.pdf

1、本文分為以下幾個(gè)部分:
　　第一部分:迷走神經(jīng)離斷大鼠胃動(dòng)力及胃組織腸膠質(zhì)細(xì)胞的改變
　　目的:在不同病程的迷走神經(jīng)離斷大鼠中，觀察胃動(dòng)力及胃組織腸膠質(zhì)細(xì)胞的改變。
　　方法:將30只雄性Sprague Dawley(SD)隨機(jī)分為正常對(duì)照組（control group，N=10），早期迷走神經(jīng)離斷組（early subdiaphragmantic vagotomy，ESDV，7天，N=10），晚期迷走神經(jīng)離斷組（te

2、rminal subdiaphragmatic vagotomy,TSDV,56天,N=10）。運(yùn)用酚紅試餐檢測(cè)各組大鼠胃排空以評(píng)估胃動(dòng)力的改變；利用RT-PCR、免疫熒光、透射電鏡等技術(shù)測(cè)定胃組織腸膠質(zhì)細(xì)胞中特異性表達(dá)物質(zhì)GFAP和S100B基因及蛋白的水平和腸膠質(zhì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化。
　　結(jié)果:（1）與對(duì)照組相比，ESDV組胃排空加快但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；TSDV組胃排空比ESDV組明顯延遲。（2）與對(duì)照組和ESDV組相比，TSDV

3、組GFAP mRNA表達(dá)量明顯下降；與ESDV組相比，TSDV組中S100B mRNA表達(dá)量明顯降低，但對(duì)照組和ESDV組中S100B mRNA表達(dá)量無明顯差異。（3）與ESDV組和對(duì)照組相比，GFAP與S100B蛋白表達(dá)量在TSDV組中顯著降低，但在ESDV與對(duì)照組中表達(dá)量未見明顯改變。（4）在ESDV組和TSDV組中，腸膠質(zhì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)受損，表現(xiàn)為線粒體腫脹和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，中間絲數(shù)量減少。
　　結(jié)論:在迷走神經(jīng)離斷大鼠中，出現(xiàn)胃

4、排空延遲，并且腸膠質(zhì)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能受損；同時(shí)腸膠質(zhì)細(xì)胞具有一定代償能力。
　　第二部分:迷走神經(jīng)離斷大鼠胃組織GDNF及其下游信號(hào)通路PI3K/Akt的變化
　　目的:探索在迷走神經(jīng)離斷時(shí)大鼠胃組織中GDNF及其下游信號(hào)通路PI3K/Akt的改變。
　　方法:建立迷走神經(jīng)離斷大鼠模型。應(yīng)用Western blot檢測(cè)胃組織GDNF、Cx43、p-Akt、pan-Akt和PGP9.5蛋白表達(dá)；應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)GDN

5、F、Cx43、pan-Akt和PGP9.5mRNA表達(dá)；應(yīng)用免疫熒光方法檢測(cè)GDNF與GFAP的定位和蛋白表達(dá)；應(yīng)用TUNEL檢測(cè)胃組織內(nèi)細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)果:（1）與對(duì)照組比較，GDNF、Cx43、PGP9.5相對(duì)蛋白表達(dá)量在早期迷走神經(jīng)離斷組明顯下降；p-Akt和pan-Akt蛋白表達(dá)量在各組未見明顯差異。（2）與對(duì)照組相比，GDNF、Cx43、PGP9.5mRNA相對(duì)表達(dá)量在早期和晚期迷走神經(jīng)離斷組均明顯降低；pan-Akt

6、 mRNA表達(dá)量在早期和晚期迷走神經(jīng)離斷組均比在對(duì)照組增加。（3）GDNF和GFAP表達(dá)在EGC上；與對(duì)照組相比，GDNF、GFAP和PGP9.5蛋白表達(dá)量在早期和晚期迷走神經(jīng)離斷組明顯下降。（4）對(duì)照組中出現(xiàn)較少TUNEL(+)細(xì)胞，而在早期和晚期迷走神經(jīng)離斷組中，TUNEL(+)細(xì)胞數(shù)目明顯增加。
　　結(jié)論:在迷走神經(jīng)離斷時(shí)，GDNF及其下游PI3K/Akt信號(hào)通路的功能受損，胃組織中凋亡細(xì)胞數(shù)目明顯增加。
　　第三部分

7、:同步雙脈沖胃電刺激對(duì)迷走神經(jīng)離斷大鼠胃動(dòng)力的影響及GDNF及其下游PI3K/Akt信號(hào)通路的研究
　　目的:探索同步雙脈沖胃電刺激能否改善迷走神經(jīng)離斷大鼠的胃動(dòng)力異常及對(duì)胃組織內(nèi)EGC的作用，并進(jìn)一步探討可能調(diào)控機(jī)制。
　　方法:雄性SD大鼠，共50只，分為5組，包括正常對(duì)照組（control，N=10），早期迷走神經(jīng)離斷組（ESDV，2周，N=10），早期迷走神經(jīng)離斷組+急性同步雙脈沖胃電刺激（ESDV+SSGES，30

8、min/天，2+2周，N=10），晚期迷走神經(jīng)離斷組（TSDV，4周，N=10），晚期迷走神經(jīng)離斷組+慢性同步雙脈沖胃電刺激（TSDV+LSSGES，30min/天，4+6周，N=10）。同步雙脈沖胃電刺激由一個(gè)長(zhǎng)脈沖（300ms,4mA）和五個(gè)短脈沖（0.33ms,4mA,100Hz）組成。利用酚紅試餐測(cè)量胃排空以評(píng)估各組大鼠胃動(dòng)力的改變，采用Western blot和RT-PCR技術(shù)測(cè)量胃組織Cx43、GDNF、p-Akt、pan-

9、Akt和PGP9.5的基因和蛋白表達(dá)，應(yīng)用免疫熒光技術(shù)測(cè)量GDNF和GFAP、PGP9.5的定位和表達(dá)，應(yīng)用透射電鏡觀察EGC超微結(jié)構(gòu)的改變，應(yīng)用TUNEL技術(shù)測(cè)定細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)果:（1）與對(duì)照組相比，胃排空在早期迷走神經(jīng)離斷組加快，在晚期迷走神經(jīng)離斷組延遲，LSGES顯著改善晚期迷走神經(jīng)離斷所致的胃排空延遲。（2）Western blot結(jié)果顯示Cx43蛋白在早期和晚期迷走神經(jīng)離斷組表達(dá)均顯著下降，但SSGES和LSGES明

10、顯增加其表達(dá)；與相應(yīng)的對(duì)照組相比，SSGES和LSGES均明顯增加GDNF的蛋白表達(dá)量，但LSGES效果優(yōu)于SSGES；與晚期迷走神經(jīng)離斷組相比，LSGES顯著增加p-Akt的蛋白表達(dá)量；各組pan-Akt表達(dá)量均未見明顯差異；PGP9.5蛋白在早期迷走神經(jīng)離斷組表達(dá)量明顯降低，但SSGES能增加其表達(dá)。（3）RT-PCR結(jié)果顯示Cx43、GDNF和PGP9.5mRNA表達(dá)量在早期和晚期迷走神經(jīng)離斷組均顯著下降，但SSGES和LSGES

11、均明顯增加其表達(dá)。（4）免疫熒光結(jié)果顯示GDNF在EGC內(nèi)表達(dá)，且在早期和晚期迷走神經(jīng)離斷組表達(dá)量下降，而SSGES和LSGES在一定程度上增加其表達(dá)；PGP9.5表達(dá)量在早期和晚期迷走神經(jīng)離斷組明顯下降，在SSGES組和LSGES組表達(dá)量均明顯上升。（5）與對(duì)照組相比，迷走神經(jīng)離斷組有較多的TUNEL（+）細(xì)胞，而LSGES和SSGES均能明顯減少TUNEL（+）細(xì)胞。（6）在對(duì)照組中EGC胞內(nèi)含有豐富的線粒體、光面和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、中間