不結(jié)球白菜離體培養(yǎng)再生體系的優(yōu)化及抗病轉(zhuǎn)基因研究.pdf

1、摘要不結(jié)球白菜離體培養(yǎng)再生體系的優(yōu)化及抗病轉(zhuǎn)基因研究摘要不結(jié)球白菜(BrasMcacarnpestrissspchinensisMakino)是我國(guó)南方重要的葉菜類蔬菜，在蔬菜的周年供應(yīng)中占有重要地位然而不結(jié)球白菜生產(chǎn)中病毒病，霜霉病及軟腐病等病害較嚴(yán)重，嚴(yán)重影響了其品質(zhì)和產(chǎn)量，利用基因工程培育新品種是急需解決的問題白菜類蔬菜是離體培養(yǎng)再生困難的一類作物，而基因工程等高科技育種技術(shù)都是建立在穩(wěn)定可靠的高頻率離體再生體系的基礎(chǔ)上探討影響不

2、結(jié)球白菜高頻率再生體系的因素具有重要的理論和實(shí)踐意義本試驗(yàn)以暑綠、蘇州青，亮白葉和矮抗五號(hào)為材料，篩選了較易再生的不結(jié)球白菜品種，并研究了基因型外植體類型以及不同的激素配比對(duì)再生頻率的影響，優(yōu)化了不結(jié)球白菜再生體系；并利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法，通過研究Km的適宜篩選濃度及加入時(shí)間，不同的外植體類型、預(yù)培養(yǎng)時(shí)間和共培養(yǎng)時(shí)間對(duì)轉(zhuǎn)化效率的影響，初步建立了不結(jié)球白菜抗病基因遺傳轉(zhuǎn)化體系，結(jié)果表明：1不同品種中，暑綠的再生頻率最高。不同外植體類型

3、中，子葉一子葉柄再生頻率最高種子發(fā)芽培養(yǎng)基中添加TDZ使幼苗生長(zhǎng)健壯，利于外植體分化，不定芽分化率均在60％=2上，子葉子葉柄在培養(yǎng)基MNTDZ05mgoL1NAA05mgL1AgN0375nagL‘1中再生頻率最高，達(dá)到80％，表明TDZ在誘導(dǎo)器官的發(fā)生中有較強(qiáng)的持續(xù)效應(yīng)2Km的適宜濃度為15mg／L，采用延期篩選的方法進(jìn)行篩選，下胚軸較子葉一子葉柄有較高的轉(zhuǎn)化效率，預(yù)培養(yǎng)和共培養(yǎng)時(shí)間均為2天，共培養(yǎng)結(jié)束后，經(jīng)GUS瞬時(shí)表達(dá)檢測(cè)為陽性

4、，并獲得了卡那霉素抗性的轉(zhuǎn)基因植株，經(jīng)PCR檢測(cè)證明InBING基因已整合到不結(jié)球白菜核基因組中關(guān)鍵詞：不結(jié)球白菜；離體再生；農(nóng)桿菌介導(dǎo)法；InBING基因ABSTRA(r2TheoptimadconcenWationofKmwas15mgL1andWeusedthedelayedselectionmethod；hypoco夠lhadhighertransformationefficiencythanpetiolewithcotyled

5、on；theprecultivafiontimeandcocultivationtimew嘴twodays；aftercocultivationthelramientexpressionofGUStestw罄positiveandWegotanfikanamycinphntsThePCRtestprovedthattheIuBINGgenehaveintegra：IedintotheplantgenomeofnonheadingChin