葛根素抑制SLE外周血淋巴細(xì)胞P-gp表達(dá)以及對糖皮質(zhì)激素干預(yù)效應(yīng)的影響.pdf

1、目的：探討葛根素對系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus,SLE）患者外周淋巴細(xì)胞P-gp的干預(yù)作用以及對糖皮質(zhì)激素干預(yù)效應(yīng)的影響，為提高SLE臨床療效提供新思路和新方法。
　　方法：1.利用淋巴細(xì)胞分離液分離培養(yǎng)健康志愿者外周血淋巴細(xì)胞，用小劑量甲基強(qiáng)的松龍（2μg/ml）誘導(dǎo)其耐藥，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞 P-gp表達(dá)、羅丹明-123（R-123）在細(xì)胞中的積累，并分析其與甲基強(qiáng)的松龍誘導(dǎo)的細(xì)胞凋

2、亡率、CD69抑制率的相關(guān)性。2.以四唑鹽比色法（MTT）篩選葛根素和維拉帕米對淋巴細(xì)胞的非細(xì)胞毒濃度。淋巴細(xì)胞分離液分離培養(yǎng)SLE患者外周血淋巴細(xì)胞，用含有葛根素的培養(yǎng)液孵育，以維拉帕米作為陽性對照組，流式細(xì)胞術(shù)檢測葛根素對SLE患者淋巴細(xì)胞P-gp表達(dá)、R-123積累的影響。3.用植物凝集素 PHA活化淋巴細(xì)胞，并用流式細(xì)胞術(shù)檢測葛根素與大劑量甲基強(qiáng)的松龍（200μg/ml）聯(lián)合干預(yù)對細(xì)胞AnnexinⅤ（％）和CD69熒光強(qiáng)度的影

3、響。
　　結(jié)果：1.小劑量甲基強(qiáng)的松龍(2μg/ml)誘導(dǎo)可使淋巴細(xì)胞P-gp表達(dá)、R-123積累率顯著增高，誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞在大劑量甲基強(qiáng)的松龍(200μg/ml)的干預(yù)下，表現(xiàn)出抑制細(xì)胞活化（CD69熒光強(qiáng)度）與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡效應(yīng)低下，該作用與錯(cuò)誤!鏈接無效。呈負(fù)相關(guān)、與R-123積累率呈正相關(guān)；2.葛根素干預(yù)72小時(shí)可顯著下調(diào)SLE患者外周血淋巴細(xì)胞P-gp表達(dá)，增加R-123在細(xì)胞中的積累，維拉帕米可顯著增加細(xì)胞中R-123的

4、積累，但對P-gp表達(dá)無顯著影響；3.葛根素干預(yù)可顯著增強(qiáng)甲基強(qiáng)的松龍誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡和抑制CD69的效應(yīng)。
　　結(jié)論：P-gp的高表達(dá)可顯著降低甲基強(qiáng)的松龍誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡效應(yīng)和抑制淋巴細(xì)胞活化作用；葛根素可顯著下調(diào)SLE外周血淋巴細(xì)胞P-gp表達(dá)和轉(zhuǎn)運(yùn)活性，增強(qiáng)甲基強(qiáng)的松龍誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡和抑制淋巴細(xì)胞活化作用。研究結(jié)果提示葛根素能在一定程度上逆轉(zhuǎn)SLE患者P-gp介導(dǎo)的激素耐藥，提高激素治療的敏感性。其作用機(jī)理可能是下調(diào)P-