特立氟胺聯(lián)合白芍總苷對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠Th17-Treg細(xì)胞平衡的影響.pdf

1、目的：
　　研究特立氟胺（Teriflunomide， TIF）聯(lián)合白芍總苷（Total glucosides of paeony，TGP）對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）小鼠脾組織中Th17細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T cell，Treg）比例及細(xì)胞因子IL-17、IL-10的影響，探討聯(lián)合用藥對(duì)EAE小鼠的治療作用，為臨床多

2、發(fā)性硬化的藥物聯(lián)合治療提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　選取75只8-10周齡的雌性C57BL/6小鼠（體重18g-20g），隨機(jī)分為5組：Control組、EAE組、TIF組、TGP組和TIF+TGP組，每組15只。以MOG35-55為抗原，輔以完全弗氏佐劑、結(jié)核菌素及百日咳毒素，建立小鼠EAE模型，Control組不予免疫。免疫當(dāng)天記為第0天，自免疫第1天開始給藥，TIF組小鼠給予TIF15mg/kg每日灌胃，TGP組小鼠

3、給予 TGP500mg/kg每日灌胃， TIF+TGP組小鼠給予 TIF15mg/kg+TGP500mg/kg每日灌胃，Control組和EAE組小鼠給予等量的溶劑每日灌胃。自免疫第1天起，每日早晚2次由兩名觀察者分別觀察小鼠的發(fā)病情況并記錄體重變化及神經(jīng)功能評(píng)分（采用Weaver15分法）。于免疫后第26天處死各組小鼠。無菌條件下取出小鼠脾組織制備脾細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，利用流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)測(cè)定各組小鼠Th17及Treg細(xì)胞比例。利用實(shí)時(shí)定量P

4、CR方法檢測(cè)小鼠脾組織細(xì)胞因子IL-17、IL-10的mRNA表達(dá)水平。利用ELISA法檢測(cè)小鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)液上清液中IL-17、IL-10的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1各組小鼠發(fā)病情況：發(fā)病率方面，Control組無發(fā)病，EAE組、TIF組、TGP組小鼠之間無明顯差別（P＞0.05），TIF+TGP組同EAE組、TIF組、TGP組相比顯著降低（P<0.05）；神經(jīng)功能評(píng)分方面，TIF組、TGP組、TIF+TGP組小鼠均顯著

5、低于EAE組（P<0.05），TIF+TGP組顯著低于TIF組、TGP組（P<0.05），TIF組與TGP組無明顯差別（P＞0.05）。
　　2各組小鼠Th17及Treg細(xì)胞比例：同Control組相比，EAE組小鼠Th17細(xì)胞比例顯著升高（P<0.05），Treg細(xì)胞比例顯著降低（P<0.05）；同EAE組相比，TIF組、TGP組、TIF+TGP組小鼠Th17細(xì)胞比例顯著降低（P<0.05）， TGP組、TIF+TGP組小鼠Tr

6、eg細(xì)胞比例顯著升高（P<0.05），TIF組小鼠Treg細(xì)胞比例無明顯差別（P＞0.05）；同TIF組、TGP組相比，TIF+TGP組小鼠Th17細(xì)胞比例顯著降低（P<0.05）， Treg細(xì)胞比例顯著升高（P<0.05）；TIF組與TGP組小鼠各細(xì)胞比例無明顯差別（P＞0.05）。
　　3各組小鼠IL-17、IL-10 mRNA表達(dá)水平：同Control組相比，EAE組小鼠IL-17 mRNA水平顯著升高（P<0.05），IL

7、-10 mRNA水平顯著降低（P<0.05）；同EAE組相比，TIF組、TGP組、TIF+TGP組小鼠IL-17 mRNA水平顯著降低（P<0.05），IL-10 mRNA水平顯著升高（P<0.05）；同TIF組、TGP組相比， TIF+TGP組小鼠IL-17 mRNA水平顯著降低（P<0.05），IL-10 mRNA水平顯著升高（P<0.05）；TIF組與TGP組小鼠IL-17、IL-10mRNA水平無明顯差別（P＞0.05）。

8、>　　4各組小鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)液上清液中IL-17、IL-10濃度：同Control組相比，EAE組小鼠IL-17濃度顯著升高（P<0.05），IL-10濃度顯著降低（P<0.05）；同EAE組相比，TIF組、TGP組、TIF+TGP組小鼠IL-17濃度顯著降低（P<0.05），IL-10濃度顯著升高（P<0.05）；同TIF組、TGP組相比，TIF+TGP組小鼠IL-17濃度顯著降低（P<0.05），IL-10濃度顯著升高（P<0.05）

9、；TIF組與TGP組小鼠IL-17、IL-10濃度無明顯差別（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1特立氟胺、白芍總苷可以減輕EAE小鼠神經(jīng)功能損傷的嚴(yán)重程度，兩者聯(lián)合效果更明顯且能顯著降低發(fā)病率。
　　2特立氟胺、白芍總苷可以降低EAE小鼠Th17細(xì)胞比例及IL-17 mRNA與蛋白表達(dá)水平，特立氟胺可以升高IL-10 mRNA與蛋白表達(dá)水平，白芍總苷可以升高Treg細(xì)胞比例及IL-10 mRNA與蛋白表達(dá)水平，兩者聯(lián)