膠州灣細(xì)菌多樣性及抗性細(xì)菌種類及其抗性基因的分子生物學(xué)研究.pdf

1、山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文膠州灣細(xì)菌多樣性及抗性細(xì)菌種類及其抗性基因的分子生物學(xué)研究姓名：任晶申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：安利國;宋林生20060501山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要我們利用D A P I 染色熒光顯微鏡技術(shù)和微生物培養(yǎng)的方法分析2 0 0 4 年9 月和1 0 月兩個月份膠州灣海水樣品中的總微生物和可培養(yǎng)細(xì)菌的數(shù)量和分布特征。D A P I染色熒光的計數(shù)結(jié)果顯示總微生物數(shù)量為1 0 6 _ 1 0 7c e

2、 l l s ／m l ，與世界上其它位于溫帶地區(qū)的半封閉性海灣微生物數(shù)量的研究結(jié)果相似。其中微生物密度最高( 1 0 V ／m 1 )的區(qū)域分布于膠州灣東北部婁山河和李村河河口及紅島漁業(yè)養(yǎng)殖區(qū)附近。這些區(qū)域的可培養(yǎng)細(xì)菌密度在整個膠州灣中也是最高，最高的站位( A S 站，李村河口附近)達(dá)到5 ．1 6 ×1 0 S ／m l 。因此，污染類型和程度以及地理和水文學(xué)特征是決定膠十t , i 灣微生物數(shù)量和分布的重要因素。通過T

3、 - R F L F 分子生物學(xué)方法和聚類分析方法研究膠州灣水體的微生物群落結(jié)構(gòu)特征，可將膠州灣內(nèi)外的細(xì)菌群落分為3 組，膠州灣灣口及灣外的D 1 ，D 3 ，D 5 ，D 6 ，D 7 站位被劃分為一組，其細(xì)菌群落更接近于受到灣外海水環(huán)境影響的細(xì)菌群落特征；位于膠州灣最內(nèi)側(cè)的站位，如A 3 ，A 5 ，B 2 ，Y 1 被劃為一組，代表膠州灣的“土著”細(xì)菌群落；C 1 ，C 3 ，C 4 站位則代表著介于二者之間的過渡性細(xì)菌群落。而同

4、時進(jìn)行的膠州灣光合細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)的T - R F L P 分析未見其與地理分布和環(huán)境有明顯相關(guān)關(guān)系?？剐约?xì)菌的分布和數(shù)量主要受到水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中抗生素的使用，以及生活和工業(yè)污水排放狀況的影響，是自然水體環(huán)境的重要水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)之一。對自然水體中的抗性細(xì)菌及其抗性基因的研究不僅對漁業(yè)養(yǎng)殖具有重要的意義而且還直接關(guān)系到人類的公共衛(wèi)生健康。膠州灣土霉素和氯霉素抗性細(xì)菌密度最高的區(qū)域均位于A 5 站，李村河口附近，說明環(huán)境是影響和決定抗性細(xì)菌分布和數(shù)量的重

5、要因素。通過對抗性細(xì)菌1 6 Sr D N A 序列分析和系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建，膠州灣內(nèi)的大部分抗生素抗性細(xì)菌屬于Y 一蛋白菌亞綱( 7 - P r o t e o b a c t e r i a ) ，其中氯霉素抗性細(xì)菌則表現(xiàn)出非常明顯的假單胞菌屬( P s e u d o m o n a ss p ．) 細(xì)菌優(yōu)勢。多重P C R 方法分析膠州灣抗性細(xì)菌中土霉素抗性基因．t e t 基因和氯霉素抗性基因．c a t 基因的分布特征。在對8

6、 4 株土霉素抗性基因的分析中，所有六種t e t 基因型．t e t A , t e t B ，t e t C ，t e t D ，t e t E 和t e t G 撼J 被檢測到，其中含量最高的是t e t A ( 3 0 ．6 ％) ，t e t B ( 2 4 5 ％) ，和把t G ( 3 6 ．7 ％) 。在對6 0 株氯霉素抗性基因的分析中，僅有1 2 株氯霉素抗性細(xì)菌被檢測到攜帶有c 口崖因，且只包括∞r(nóng) I 和c a