小鼠胞漿內(nèi)精子注射的研究.pdf

1、該研究以piezo操作系統(tǒng)為技術(shù)支撐,在掌握小鼠卵母細(xì)胞胞漿內(nèi)精子注射技術(shù)(ICSI)的基礎(chǔ)上,進(jìn)行了ICSI技術(shù)生產(chǎn)試管小鼠及轉(zhuǎn)基因小鼠的嘗試.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明1、Piezo系統(tǒng)對(duì)小鼠卵膜損傷比較大,DBA♂×C57♀雜交鼠(B6D2 F1)與昆明白(KM)鼠卵在注射后1h的成活率分別只有55.5﹪和23.3﹪,操作液中添加3﹪蔗糖可以明顯提高兩者ICSI成活率(88.5﹪vs55.5﹪P<0.01,84.5﹪vs 23.3﹪P<0.01

2、);2、以Hepes-CZB+3﹪蔗糖做操作液,用來(lái)自成年KM鼠附睪尾的新鮮精子頭和pEGFP-N1質(zhì)粒孵育處理凍融精子頭,直接注射到B6D2 F1小鼠卵母細(xì)胞質(zhì)中,注射后1 h,83.3﹪的卵母細(xì)胞仍然存活,鮮精組和凍精組各有92.3﹪和83.0﹪成活卵子排出極體、出現(xiàn)原核.用CZB溶液繼續(xù)培養(yǎng)ICSI胚胎,兩組的卵裂率、桑椹胚率、囊胚率分別為(97.8﹪vs 94.7﹪)、(64﹪vs 64.5﹪)、(5﹪,vs 24.7﹪).其中

3、桑椹胚率、囊胚率均顯著低于體內(nèi)受精對(duì)照組(64﹪,64.5﹪vs 88﹪;5﹪,24.7﹪vs70﹪P<0.01);3、隨機(jī)抽取16枚3.5d凍精I(xiàn)CSI囊胚,紫外燈下檢察胚胎發(fā)光情況,發(fā)現(xiàn)有5枚(31.3﹪)囊胚顯示有GFP表達(dá);4、將鮮精組原核期120枚胚胎和82枚2-cell胚胎及凍精組135枚原核期胚胎移植后移植到同期km假孕母鼠受體內(nèi),分別出生28只、3只、18只ICSI小鼠(黑色或灰色),效率分別為23.3﹪,4﹪,13.3