ERK1-2和P38MAPK通路在BMP9誘導C3H10T1-2細胞向心肌樣細胞分化中的作用.pdf

1、第一部分：pAdEasyBMP9和pAdEasyGFP的擴增，C3H10T1/2細胞的誘導
　　目的：利用HEK293細胞擴增收集高滴度pAdEasyBMP9和pAdEasyGFP，以此誘導C3H10T1/2細胞使之呈BMP9高表達。
　　方法：利用HEK293細胞，反復擴增后收集得到高滴度pAdEasyGFP和pAdEasyBMP9。當C3H10T1/2細胞生長融合至60％左右時，加入AdEasyGFP和AdEasyBMP

2、9誘導細胞，8小時后換液，倒置顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白，流式細胞術測誘導效率。
　　結果：反復擴增后得到高滴度AdEasyGFP和AdEasyBMP9。AdEasyBMP9誘導C3H10T1/2細胞24小時和21天誘導率效率分別為59.99％和42.16％。
　　結論：反復擴增HEK293細胞可得到高滴度AdEasyGFP和AdEasyBMP9，AdEasyGFP和AdEasyBMP9誘導C3H10T1/2細胞后可使其高表達

3、GFP和BMP9。
　　第二部分：ERKI/2和P38MAPK通路在BMP9誘導C3H10T1/2細胞分化過程中的激活
　　目的：研究ERK1/2和p38MAPK通路在BMP9誘導C3H10T1/2細胞分化過程中的激活。
　　方法：免疫印跡檢測經(jīng)pAdEasyBMP9誘導24小時的C3H10T1/2細胞phospho-ERK1/2和ERK1/2、phospho-P38MAPK和P38MAPK的表達，免疫熒光定位phos

4、pho-ERK1/2、phospho-P38MAPK。
　　結果：
　　1.pAdEasyBMP9促進phospho-ERK1/2、phospho-P38MAPK的表達增高，卻不影響ERK1/2、P38MAPK的表達水平；
　　2.經(jīng)pAdEasyBMP9誘導前的C3H10T1/2細胞和經(jīng)pAdEasyGFP誘導的C3H10T1/2細胞，phospho-ERK1/2和phospho-P38MAPK彌散分布于整個細胞內(nèi)；

5、pAdEasyBMP9誘導C3H10T1/2細胞24小時，phospho-ERK1/2有從胞漿到胞核移動、表達于胞核的不同狀態(tài)；phospho-P38MAPK有表達于胞漿和胞核、僅表達于胞核的不同狀態(tài)。
　　結論：pAdEasyBMP9誘導C3H10T1/2細胞分化過程中能夠激活ERK1/2和P38MAPK通路。
　　第三部分：ERK1/2和P38MAPK通路在BMP9誘導C3H10T1/2細胞向心肌樣細胞分化過程中的作用<

6、br>　　目的：研究ERK1/2和P38MAPK通路在BMP9誘導C3H10T1/2細胞向心肌樣細胞分化過程中的作用。
　　方法：U0126和SB203580分別阻斷C3H10T1/2細胞ERK1/2和P38MAPK通路，pAdEasyBMP9誘導21天時免疫印跡檢測心肌特異性蛋白CX43，cTnT的表達，免疫熒光檢測心肌特異性蛋白cTnT、α-MHC的表達，Q-RT-PCR檢測心肌特異性基因GATA4，MEF2C的表達。