龍芽楤木體細胞胚發(fā)生過程中特異性蛋白表達差異的研究.pdf

1、該論文采用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳技術,對龍芽楤木體細胞胚發(fā)生過程中愈傷組織形態(tài)建成、胚性愈傷轉化、胚狀體發(fā)育和植株再生四個階段的可溶性蛋白的動態(tài)變化進行分析.根據可溶性蛋白動態(tài)變化的特點,我們建立了龍芽楤木體細胞胚發(fā)生過程的蛋白質表達模型,并找到了一些與體細胞胚發(fā)生相關的特異性蛋白.由于體細胞胚胎發(fā)生還受到一系列內外環(huán)境因素的調節(jié),所以研究外界因子對特異性蛋白表達的影響也是研究體細胞胚發(fā)生過程分子機制的重要組成部分.我們探討了植物激

2、素、活性炭和蔗糖三種外界因子對體細胞胚的調控機理,試圖進一步揭示體細胞胚發(fā)生的分子基礎. 龍芽楤木體細胞胚發(fā)生過程中可溶性蛋白表達模型的建立,從整體上體現(xiàn)了可溶性蛋白表達的時空特異性. 在龍芽楤木體細胞胚發(fā)生過程中,我們發(fā)現(xiàn)了若干胚胎發(fā)生相關蛋白.正是這些胚胎發(fā)生相關蛋白的選擇性表達促成了體細胞胚的發(fā)生和發(fā)育.首先,在胚性愈傷和胚狀體發(fā)育階段特異性表達的蛋白組分有49KD、40KD、31KD、22KD和20KD.其中49KD在胚性愈傷組

3、織、球形胚和成熟的子葉胚三個階段共同表達,31KD在胚性愈傷組織、球形胚和心形胚三個階段共同表達.它們可以分別作為胚性愈傷組織、胚狀體發(fā)育階段或其中某一特定時期的分子標記.另外,53KD蛋白組分的表達量在胚狀體發(fā)育階段明顯增加,該種蛋白組分可能也對胚狀體的發(fā)育起到了促進作用.其次,70KD、63KD、55KD、45KD和36KD的表達都起始于愈傷組織形態(tài)建成階段,并在整個龍芽楤木離體培養(yǎng)再生體系中動態(tài)表達.其中36 KD蛋白組分在胚性愈

4、傷組織和胚狀體中表達而在非胚性愈傷組織和再生植株中不表達,它是直接與愈傷組織胚性發(fā)生能力相關的特異性蛋白.55 KD蛋白組分受生長素2,4-D的負調控,并對體細胞胚的發(fā)生具有顯著的促進作用.這些早期表達的蛋白組分可能是植物中共同存在的體細胞胚發(fā)生相關蛋白,對胚狀體發(fā)生的決定起著重要作用.此外,我們還發(fā)現(xiàn),與愈傷組織增殖有關的43 KD愈傷組織特異性蛋白;在胚性愈傷組織和胚狀體發(fā)生階段特異性缺失的35 KD蛋白組分,它可能與胚狀體發(fā)生能力