浙江及周邊省手足口病病原譜流行規(guī)律及腸道病毒變異變遷研究.pdf

1、手足口病(Hand，footandmouthdisease，HFMD)及相關(guān)臨床綜合征是危害兒童健康的重要疾病，腸道病毒71型(Enterovirus71，EV71)和柯薩奇病毒A組16型(CoxsackievirusA16，CA16)是引起手足口病的兩種主要的病原，常相伴造成手足口病的暴發(fā)流行。EV71和CA16均為單股正鏈RNA病毒，屬于小RNA病毒科(Picornaviridae)，腸道病毒屬(Enterovirus)成員。EV7

2、1是嗜神經(jīng)性病毒，除了引起兒章HFMD外，容易導(dǎo)致嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)并發(fā)癥，致死率高，是脊髓灰質(zhì)炎病毒受到控制后腸道病毒中頗受矚目的一員。CA16是導(dǎo)致兒童HFMD的另一種重要病原，所引起的臨床癥狀與EV71感染引起的HFMD難于區(qū)別，但通常情況下，CA16感染一般不引起嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)的疾病，由于其亞臨床感染常常被忽略。以往對CA16的研究主要集中于與EV71感染的鑒別診斷上，近年來由于CA16與心肌炎、心包炎及其它嚴(yán)重疾病的相關(guān)而

3、逐漸受到重視。
　　 目的：
　　 1、調(diào)查我國浙江及周邊地區(qū)2010年腸道病毒感染率；了解本地區(qū)腸道病毒感染的流行病學(xué)特征；明確影響手足口病病原檢出率的影響因素，為手足口病的有效防控提供科學(xué)依據(jù)。
　　 2、通過對腸道病毒的VP1片段進(jìn)行核苷酸序列測定，分析浙江地區(qū)腸道病毒分離株的基因型別，進(jìn)一步了解腸道病毒浙江株的分子生物學(xué)性狀及與其他腸道毒株的遺傳進(jìn)化距離，完善我國腸道病毒的基因型和亞型分類資料，及時監(jiān)測本

4、地區(qū)的腸道病毒流行株以及進(jìn)行疫苗的研制打下基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 1、標(biāo)本檢測及病毒分離：采用腸道病毒核酸檢測試劑盒(RT-PCR熒光探針法)對手足口患者標(biāo)本的各類標(biāo)本進(jìn)行檢測，將部分腸道病毒檢測陽性標(biāo)本接種到人橫紋肌肉瘤細(xì)胞(RD細(xì)胞)進(jìn)行病毒的分離培養(yǎng)。
　　 2、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)：對分離毒株采用腸道病毒核酸檢測試劑盒進(jìn)行驗(yàn)證，并使用自己設(shè)計的EV71和CA16VP1區(qū)特異性引物分別對毒株進(jìn)行VP1片段的擴(kuò)

5、增。
　　 3、生物信息學(xué)分析：參考EV71和CA16各型別的代表株以及中國大陸其他地區(qū)測定的EV71病毒序列，應(yīng)用DNASTAR、DANMAN等生物學(xué)軟件對浙江地區(qū)EV71和CA16的核苷酸及氨基酸序列進(jìn)行系統(tǒng)的分析。
　　 結(jié)果：
　　 1、采用腸道病毒核酸檢測試劑盒共檢測手足口臨床診斷病例1011份標(biāo)本，其中541份標(biāo)本腸道病毒通用引物檢測為陽性，293份標(biāo)本EV71陽性，180份標(biāo)本CoxA16陽性，其它

6、型腸道病毒56份。不同標(biāo)本的類型的腸道病毒檢出率不同，不同時間采集的標(biāo)本檢出率也有差別。
　　 2、在603例HFMD實(shí)驗(yàn)室診斷病例中，大部分以輕癥為主，只有少部分會出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)的并發(fā)癥。在重癥病例中，以EV71感染為主。
　　 3、1～6歲組是腸道病毒感染的主要人群，男女發(fā)病基本相同，以散居兒童為主。
　　 4、6株EV71之間的VP1基因核苷酸同源性為92.2％-98.5％，氨基酸同源性為99.0％

7、-100％，通過基因比對，發(fā)現(xiàn)此次6株EV71屬于C4亞型。
　　 5、將4株浙江地區(qū)分離株的核苷酸序列和氨基酸序列進(jìn)行同源性比對，核苷酸同源性為91.8％～99.8％，氨基酸同源性均為100％。4株杭州分離株在進(jìn)化樹中分別歸屬于B亞型。
　　 結(jié)論：
　　 1、浙江及周邊地區(qū)的手足病患者的病源譜構(gòu)成以EV71和CA16為主。
　　 2、不同標(biāo)本類型其腸道病毒的陽性檢出率不同。最好在發(fā)病的早期采集患者的各

8、類標(biāo)本進(jìn)行檢測。
　　 3、由腸道病毒引起的HFMD病例中一般癥狀較輕，而HFMD的重癥患者以EV71感染為主。
　　 4、男性和女性均可感染腸道病毒發(fā)生HFMD;1～6歲組兒童是腸道病毒感染的主要人群，以散居兒童為主。
　　 5、2010年浙江地區(qū)流行的EV71毒株屬于C4亞型，與近年在中國大陸發(fā)現(xiàn)的其他分離株的流行一致。重癥與輕癥患兒之間的氨基酸序列未見明顯差別。
　　 6、CA16毒株基因分型及系統(tǒng)