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1、人-動(dòng)物異種間體細(xì)胞核移植技術(shù)可利用動(dòng)物的卵母細(xì)胞為核受體,以人類(lèi)的體細(xì)胞為核供體構(gòu)建異種間體細(xì)胞克隆胚,通過(guò)體外培養(yǎng)獲取人源性胚胎干細(xì)胞。這項(xiàng)技術(shù)為獲得人類(lèi)干細(xì)胞以及人類(lèi)器官移植開(kāi)辟了一條嶄新的途徑。但極低的成功率限制了這項(xiàng)技術(shù)在實(shí)踐中的應(yīng)用,這可能歸因于體細(xì)胞核在異種卵母細(xì)胞中未能完全再程序化。同時(shí),異種間克隆胚存在廣泛的線(xiàn)粒體雜合現(xiàn)象,即來(lái)源于供受體細(xì)胞的兩套線(xiàn)粒體共存。影響異種間克隆胚及克隆后代中線(xiàn)粒體雜合性的因素還不清楚。動(dòng)物
2、源性線(xiàn)粒體的存在,是人-動(dòng)物異種體細(xì)胞克隆胚胎應(yīng)用于實(shí)踐的一大障礙。 本實(shí)驗(yàn)以體外培養(yǎng)成熟的牛卵母細(xì)胞為核受體,分別以人胎兒成纖維細(xì)胞(HFFs)、牛胎兒成纖維細(xì)胞(BFFs)為核供體構(gòu)建同異種間體細(xì)胞克隆胚,通過(guò)體外培養(yǎng)觀(guān)察兩者在發(fā)育能力方面的差異。此外,在早期發(fā)育的不同階段(2-、4-、8-、桑椹胚、囊胚),采用PCR的方法檢測(cè)了異種間克隆胚中供受體來(lái)源的線(xiàn)粒體DNA(mtDNA)存在情況,以及異種克隆胚胎核基因來(lái)源情況。
3、 人-牛異種克隆胚胎構(gòu)建試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),試驗(yàn)的批次效應(yīng)明顯,說(shuō)明卵母細(xì)胞與供體細(xì)胞的協(xié)調(diào)性有很強(qiáng)的隨機(jī)性,兩者的協(xié)調(diào)性也是影響克隆效率的最關(guān)鍵因素。 同異種間克隆胚的體外發(fā)育結(jié)果表明,同種間克隆胚的體外囊胚發(fā)育率(10.1%)高于異種間克隆胚的體外囊胚發(fā)育率(2.88%),且這種差異主要是由異種間克隆胚在8-細(xì)胞到桑椹胚期間的發(fā)育能力顯著低于同種間克隆胚(p<0.05)造成的。 對(duì)異種間克隆胚核基因來(lái)源的檢測(cè)表
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