水牛-豬異種體細(xì)胞核移植.pdf

1、水牛-豬異種體細(xì)胞核移植(iSCNT)是指將水牛體細(xì)胞注射到豬去核卵子中,通過(guò)激活、培養(yǎng)等步驟觀察其后續(xù)發(fā)育情況。異種體細(xì)胞核移植對(duì)于研究核-質(zhì)互作、細(xì)胞核重編程等機(jī)制提供很好的理論依據(jù),利用異種體細(xì)胞核移植還可以保護(hù)瀕臨滅絕的珍稀物種,尤其對(duì)于卵母細(xì)胞不易獲得的物種,近年來(lái)異種核移植還用來(lái)作為人類器官移植的供體,以豬卵子作為受體結(jié)合轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)與人類器官相似的組織,研究人類疾病發(fā)病機(jī)理及解決方法。本實(shí)驗(yàn)采用不同的融合液組分,研究鈣離

2、子濃度對(duì)本實(shí)驗(yàn)條件下豬同種核移植發(fā)育的影響;篩選最適合水牛-豬異種核移植胚胎發(fā)育的激活條件,此外,探究了培養(yǎng)滴體積與胚胎個(gè)數(shù)的比例對(duì)于其發(fā)育的效果,并堅(jiān)定了水牛-豬異種核移植。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果如下:
　　1.不同激活電壓對(duì)水牛-豬異種核移植發(fā)育的影響:采用1.0mM的融合激活液,分別采用120v/mm,150v/mm,180v/mm的電場(chǎng)強(qiáng)度,30us、2DC的激活參數(shù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)電場(chǎng)強(qiáng)度對(duì)胚胎發(fā)育的作用沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異。
　　

3、2.不同融合激活方法對(duì)水牛-豬異種核移植發(fā)育的影響:采用電融合激活與電融合后化學(xué)激活(離子霉素+6-DMAP)的方法,這兩種方法對(duì)水牛-豬異種體細(xì)胞核移植發(fā)育沒(méi)有差異。
　　3.培養(yǎng)滴體積與胚胎個(gè)數(shù)的比例對(duì)其發(fā)育的效果:不同重構(gòu)胚個(gè)數(shù)放在20ul大小的PZM-3中培養(yǎng),對(duì)異種核移植發(fā)育沒(méi)有影響。
　　4.轉(zhuǎn)基因水牛-豬異種核移植發(fā)育的鑒定:采用轉(zhuǎn)染了綠色熒光蛋白的轉(zhuǎn)基因水牛體細(xì)胞進(jìn)行核移植結(jié)果發(fā)現(xiàn)各個(gè)時(shí)期的胚胎均可觀察到綠色