重組人肝活素(HPS)的抗肝損傷活性研究.pdf

1、肝臟是人體內(nèi)重要的功能器官，具有代謝、解毒、免疫、凝血等多種作用；但肝臟易受多種因素刺激，輕則導(dǎo)致肝功能紊亂，重則引起急性肝衰竭，甚至死亡。肝病在我國一直是一個(gè)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題，病毒、藥物等導(dǎo)致的嚴(yán)重肝損傷(肝衰竭)都具有起病急、預(yù)后差、病死率高的特點(diǎn)，目前臨床上尚缺乏有效的治療手段，研究并找到不僅可以阻止肝細(xì)胞壞死、而且能促進(jìn)肝再生的藥物一直是臨床上面臨的重大課題。Hepassocin(HPS)是一種具有肝臟組織特異性的促有絲分裂因

2、子，通過自分泌循環(huán)的方式調(diào)節(jié)正常肝細(xì)胞的增殖，對(duì)CCl4、D-氨基半乳糖(D-galN)誘導(dǎo)的肝損傷具有較好的降酶保肝作用。
　　本課題依據(jù)HPS的生物學(xué)特性，對(duì)HPS開展臨床前抗肝損傷活性研究，包括動(dòng)物模型評(píng)價(jià)和體外評(píng)價(jià)兩部分：在動(dòng)物模型評(píng)價(jià)方面，首先利用CCl4誘導(dǎo)的肝損傷模型確定HPS的給藥方案即造模前12h，造模后24h、48h、72h給藥，建立給藥譜，在此基礎(chǔ)上研究HPS對(duì)此模型小鼠的保護(hù)作用，發(fā)現(xiàn)HPS能提高肝損傷小鼠

3、的存活率，降低ALT、AST水平，HE染色結(jié)果表明HPS能降低肝組織壞死程度，酶聯(lián)免疫吸附(TUNEL)結(jié)果顯示HPS能減少肝細(xì)胞凋亡，增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)結(jié)果表明HPS能促進(jìn)肝細(xì)胞的增殖。通過D-galN/LPS誘導(dǎo)的肝損傷模型進(jìn)一步評(píng)價(jià)HPS的活性，發(fā)現(xiàn)HPS同樣可以降低小鼠的死亡率、轉(zhuǎn)氨酶水平、肝組織壞死程度， Real-time PCR法檢測(cè)凋亡及炎癥因子的mRNA水平，CBA法檢測(cè)血清中炎癥因子的表達(dá)，證明HPS可降低相

4、關(guān)凋亡及炎癥因子的表達(dá)。此外，本研究還評(píng)價(jià)了HPS對(duì)CCl4、D-galN誘導(dǎo)大鼠肝損傷、刀豆蛋白A(Con A)誘導(dǎo)小鼠肝損傷的保護(hù)作用。體外評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，HPS能促進(jìn)小鼠原代肝細(xì)胞的增殖、降低CCl4處理對(duì)L02細(xì)胞的損傷。本研究檢測(cè)了不同劑量CCl4誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷及肝切除模型HPS在小鼠血清中的表達(dá)變化，并比較了HPS的表達(dá)與肝損傷程度的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)隨著CCl4劑量的增加，小鼠死亡率顯著升高，肝損傷程度增加，HPS在小鼠血清及