煙草重要病蟲分子鑒定與檢驗.pdf

1、煙草病蟲害種類繁多，傳統(tǒng)判定方式具備周期長、進程龐大等缺點。檢疫部門需要經(jīng)常檢驗進出口煙葉是否攜帶危險性病蟲害，如何改進檢驗技術(shù)和提高檢驗效率成為檢疫部門亟待解決的問題。本研究利用分子方法檢驗了7種重要煙草病蟲，包括2種煙草病原真菌、2種煙草病原細菌、1種煙草病毒和2種煙葉倉儲期害蟲，為煙葉進出口病蟲害快速檢驗檢疫提供技術(shù)支持。
　　1 Colletotrichum nicotianae和Alternaria alternata的

2、分子鑒定和檢測
　　通過煙草炭疽病菌rDNA核苷酸序列，比對核苷酸序列后設(shè)計出特異性引物進行PCR擴增，分別以煙草炭疽菌（C. nicotiana）、蘋果炭疽菌、梨炭疽菌（Pear Anthracnose）、黑線炭疽菌（Cdenatium）、草莓炭疽菌（Colletotrichum fragariae Brooks）、瓜蔞炭疽菌（ trichosanthes kirilowi anthracnose pathogen）和麥冬炭疽菌

3、（dwarf lilyturf tuber）不同炭疽菌株為模板，只有煙草炭疽菌DNA中能夠擴增出一條亮帶；分別以8個分離自煙草的菌株DNA為pcr模板，只能夠從煙草炭疽病菌DNA中擴增出一條亮帶。通過對比測序所得到的煙草赤星病菌rDNA核苷酸序列，對比保守區(qū)差異核苷酸序列設(shè)計特異性引物進行pcr擴增，分別以8個分離自煙草的菌株DNA為pcr模板，只能夠從煙草炭疽病菌DNA中擴增出一條亮帶。
　　2 Pseudomonas syri

4、ngae和Ralstonia solanacearum的分子鑒定和檢測
　　對較測序得到的煙草野火菌rDNA核苷酸序列，對較保守區(qū)差異核苷酸序列后設(shè)計特異性引物進行 pcr擴增，以煙草野火病菌和煙草青枯病菌 DNA為 pcr模版，只能從煙草野火病菌 DNA中擴增一條亮帶。比較得到的煙草青枯菌的rDNA核苷酸序列，比較保守區(qū)核苷酸序列后設(shè)計引物進行pcr擴增，以煙草青枯病菌和煙草野火病菌DNA為pcr模版，僅能從煙草野火病菌DNA中

5、擴增一條亮帶。
　　3 TMV的分子檢測
　　比對煙草花葉病毒（TMV）cp基因核苷酸序列，設(shè)計特異性引物進行PCR擴增，從新鮮煙葉、干枯的煙葉病殘體以及初烤煙葉中均能擴增出TMV cp基因。
　　4 Phestia elutell和Lasioderma serricorne的分子鑒定和檢測
　　根據(jù)煙草粉螟COI基因核苷酸序列，設(shè)計特異性引物，進行PCR擴增，從煙草粉螟的卵、幼蟲、蛹、成蟲4種蟲態(tài)的DNA中均能