多巴胺對(duì)大鼠胰島素分泌的影響及可能作用機(jī)制.pdf

1、目的：
　　多巴胺在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，在外周也影響著機(jī)體的某些功能。本實(shí)驗(yàn)通過離體胰島素分泌實(shí)驗(yàn)，膜片鉗和鈣成像技術(shù)探討多巴胺對(duì)大鼠胰島素分泌的影響以及相關(guān)的作用機(jī)制。
　　方法：
　?。?）雄性wistar大鼠斷頭處死后，將1g·L-1膠原酶P溶液緩慢的注入到膽總管中,分離的胰腺經(jīng)37℃水浴消化、 Histopaque1077梯度離心得到單個(gè)胰島。使用5g·L-1的Dispase II消化胰島，將得到

2、的胰島細(xì)胞放入孵箱內(nèi)備用。（2）分得的胰島經(jīng)過夜修復(fù)后，采用放射免疫分析法測(cè)得不同藥物干預(yù)后胰島素含量的變化。（3）應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄經(jīng)過多巴胺、D2-like受體激動(dòng)劑 Quinpirole以及阻斷劑Eticlopride分別干預(yù)后，對(duì)胰島β細(xì)胞電壓依賴性鉀通道（Kv）、電壓依賴性鈣通道和動(dòng)作電位（AP）的影響。（4）應(yīng)用鈣成像技術(shù)檢測(cè)灌注多巴胺和Quinpirole后對(duì)胰島細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響。
　　結(jié)果：
　　

3、（1）采用膠原酶P消化、1077梯度離心所得到的胰島，形態(tài)規(guī)整，多成圓形或橢圓形，表面光滑，質(zhì)地飽滿，直徑約在100~300μm之間，偶有少量胰島與腺泡相連。Dispase II消化所得到的胰島細(xì)胞，多成球體，表面圓滑，單個(gè)或多個(gè)細(xì)胞聚集分布。（2）胰島素分泌試驗(yàn)中，多巴胺呈濃度依賴性抑制了胰島素的釋放，并隨外界環(huán)境中糖濃度的升高抑制作用表現(xiàn)得更為顯著。在16.7mM葡萄糖的基礎(chǔ)上，10μM D1-like受體激動(dòng)劑SKF38393對(duì)分

4、泌的影響沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；而在同樣濃度葡萄糖的環(huán)境中，10μM D2-like受體激動(dòng)劑 Quinpirole明顯地抑制了胰島素的釋放（對(duì)照組，150.02±19.49μmol·L-1，n=6；Quinpirole組，91.70±6.66μmol·L-1，n=6，p<0.01）。10μM D2-like受體的阻斷劑 Eticlopride對(duì)胰島素的分泌沒有影響（對(duì)照組，136.81±5.60μmol·L-1，n=6；Eticlopride

5、組，123.32±11.59μmol·L-1，n=6，p>0.05)，但可以在很大程度上消除多巴胺對(duì)胰島素分泌的影響（多巴胺組，47.24±6.35μmol·L-1， n=6；多巴胺+Eticlopride組，117.16±7.58μmol·L-1，n=6，p<0.001)。（3）膜片鉗實(shí)驗(yàn)中，10μM多巴胺對(duì)胰島β細(xì)胞上Kv電流有明顯地促進(jìn)作用，將電壓鉗制在80mV時(shí)，記錄到多巴胺組（109.92±6.68 pA/pF，n=6）的電流

6、密度，與對(duì)照組（69.79±2.96 pA/pF，n=6）相比p<0.001；10μM D2-like受體的激動(dòng)劑Quinpirole對(duì)β細(xì)胞上Kv電流也有促進(jìn)作用，電壓鉗制在80mV時(shí)，記錄到Quinpirole組（123.85±8.27 pA/pF， n=6）的電流密度，與對(duì)照組（84.45±5.39 pA/pF，n=6）相比p<0.01。10μM D2-like受體阻斷劑Eticlopride本身對(duì)Kv沒有影響，但可以消除多巴胺對(duì)

7、Kv電流的作用（對(duì)照組，84.87±3.50 pA/pF，n=6；Eticlopride組，76.24±3.76 pA/pF，n=6；Eticlopride+多巴胺組，81.58±3.85 pA/pF，n=6）。10μM多巴胺抑制了電壓依賴性鈣通道(對(duì)照組，-3.68±0.35pA/pF，n=6；多巴胺組，-2.74±0.48 pA/pF，n=6，p<0.05)，而10μM D2-like受體的激動(dòng)劑Quinpirole對(duì)鈣通道沒有影響

8、。10μM多巴胺明顯縮短了動(dòng)作電位的時(shí)程（對(duì)照組，59.58±4.69 ms，n=6；多巴胺組，32.97±3.17ms，n=6，p<0.001），而10μM D2-like受體阻斷劑 Eticlopride可以消除多巴胺對(duì)動(dòng)作電位時(shí)程的影響。（4）鈣成像實(shí)驗(yàn)中，以2.8mM葡萄糖為基線，16.7mM葡萄糖使細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高，而10μM多巴胺和10μM D2-like受體的激動(dòng)劑Quinpirole在16.7mM葡萄糖的基礎(chǔ)上均使得

9、細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度明顯下降。
　　結(jié)論：
　　（1）使用膠原酶P和Dispase II消化所得到的胰島和胰島細(xì)胞功能狀態(tài)良好。
　　（2）多巴胺和D2-like受體激動(dòng)劑Quinpirole抑制大鼠胰島素的釋放，并且多巴胺的作用可以被D2-like受體的阻斷劑Eticlopride很大程度上所消除。
　?。?）多巴胺和 Quinpirole都明顯地促進(jìn)了 Kv通道，而且多巴胺的作用可以被Eticlopride所消除

10、。
　　（4）多巴胺抑制了電壓依賴性鈣通道，減少細(xì)胞外鈣離子的內(nèi)流，而 Quinpirole對(duì)鈣通道并沒有產(chǎn)生影響。
　?。?）多巴胺縮短了動(dòng)作電位的時(shí)程，Eticlopride可以消除這一作用。（6）多巴胺和Quinpirole均使得細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度減少。
　　綜上所述，多巴胺抑制大鼠胰島素的釋放，而這一抑制作用主要由D2-like受體所介導(dǎo)。多巴胺激活D2-like受體后，促進(jìn)了電壓依賴性鉀通道，細(xì)胞復(fù)極增快，動(dòng)作