多潘立酮對胰島素分泌的影響及相關(guān)機(jī)制.pdf

1、目的：
　　已有研究報(bào)道多巴胺在中樞和外周多個層面發(fā)揮對糖代謝的調(diào)控作用。胰島β細(xì)胞自身可以合成多巴胺，多巴胺和多巴胺D2受體激動劑對胰島有抑制胰島素分泌的作用。多潘立酮（DPD）作為經(jīng)典的多巴胺D2受體拮抗劑，在臨床上應(yīng)用較為廣泛。因?yàn)樗忻鞔_的促進(jìn)胃動力和止吐作用，故而經(jīng)常被用來治療糖尿病胃病。有少數(shù)研究（臨床試驗(yàn)和動物實(shí)驗(yàn)）闡述了應(yīng)用多潘立酮對胰島素分泌的影響，然而研究結(jié)論并不統(tǒng)一。所以本實(shí)驗(yàn)室就多潘立酮對胰島素分泌的影響進(jìn)

2、行了在體和離體實(shí)驗(yàn)，并且嘗試研究了相關(guān)的作用機(jī)制，為多潘立酮的臨床應(yīng)用提供更多依據(jù)，并在多巴胺和能量代謝系統(tǒng)關(guān)系的研究領(lǐng)域增加新的證據(jù)。
　　方法:
　　1.給c57小鼠腹腔注射多潘立酮溶液，測定其對腹腔注射葡萄糖耐量（IPGTT）及同步胰島素釋放的影響。
　　2.處死小鼠后，迅速打開小鼠腹腔，將小腸撥至一側(cè)，暴露并剝離一段膽管，找到膽總管與十二指腸交匯處，以止血鉗夾閉壺腹部乳頭區(qū)，將配置好的膠原酶Ⅴ從剝離好的一段膽總

3、管打入胰腺，小心剝離胰腺，38℃水浴震蕩消化16 min，手工挑取小鼠胰島。用Dispase II消化得到小鼠胰島β細(xì)胞。
　　3.將分得的胰島培養(yǎng)過夜后，用放射性免疫分析法檢測多潘立酮干預(yù)對小鼠胰島素分泌的影響。
　　4.采用鈣離子成像技術(shù)檢測多潘立酮對胰島β細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響。
　　5.胰島培養(yǎng)過夜后，用ELISA分析法檢測多潘立酮干預(yù)對細(xì)胞內(nèi)環(huán)磷酸腺甘(cAMP)含量的影響。
　　結(jié)果：
　　1.

4、單次腹腔注射（IP）多潘立酮（DPD5mg/Kg）或DMSO溶劑后檢測IPGTT中血糖和血漿胰島素濃度，結(jié)果提示多潘立酮增強(qiáng)了葡萄糖刺激的胰島素釋放，并且在30分鐘時濃度較對照組顯著升高（n=6 P<0.05）。多潘立酮組血糖值在多個時點(diǎn)（5-60分）較對照組有升高趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2.在離體胰島素分泌實(shí)驗(yàn)中，高糖（16.7mM）時多潘立酮對分離的胰島有促胰島素分泌作用，并且其促分泌作用隨著藥物濃度的增加而呈現(xiàn)逐漸加強(qiáng)趨

5、勢。低糖（2.8mM）時多潘立酮沒有促胰島素分泌作用。因而，在除外在體實(shí)驗(yàn)中其他機(jī)制參與的情況下，該實(shí)驗(yàn)證實(shí)了即刻作用后多潘立酮可以增強(qiáng)葡萄糖刺激的胰島素分泌（GSIS）。
　　3.鈣離子成像技術(shù)顯示，在16.7mM葡萄糖的基礎(chǔ)上，多潘立酮可進(jìn)一步升高β細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度和鈣離子振蕩頻率。
　　4.在高糖環(huán)境下（16.7mM）孵育小鼠胰島，較溶劑對照組，多潘立酮可顯著增加胰島β細(xì)胞內(nèi)的cAMP含量，高糖+溶劑對照組(n=12