多潘立酮對胰島素分泌的影響及相關(guān)機制.pdf

1、目的：
　　已有研究報道多巴胺在中樞和外周多個層面發(fā)揮對糖代謝的調(diào)控作用。胰島β細胞自身可以合成多巴胺，多巴胺和多巴胺D2受體激動劑對胰島有抑制胰島素分泌的作用。多潘立酮（DPD）作為經(jīng)典的多巴胺D2受體拮抗劑，在臨床上應(yīng)用較為廣泛。因為它有明確的促進胃動力和止吐作用，故而經(jīng)常被用來治療糖尿病胃病。有少數(shù)研究（臨床試驗和動物實驗）闡述了應(yīng)用多潘立酮對胰島素分泌的影響，然而研究結(jié)論并不統(tǒng)一。所以本實驗室就多潘立酮對胰島素分泌的影響進

2、行了在體和離體實驗，并且嘗試研究了相關(guān)的作用機制，為多潘立酮的臨床應(yīng)用提供更多依據(jù)，并在多巴胺和能量代謝系統(tǒng)關(guān)系的研究領(lǐng)域增加新的證據(jù)。
　　方法:
　　1.給c57小鼠腹腔注射多潘立酮溶液，測定其對腹腔注射葡萄糖耐量（IPGTT）及同步胰島素釋放的影響。
　　2.處死小鼠后，迅速打開小鼠腹腔，將小腸撥至一側(cè)，暴露并剝離一段膽管，找到膽總管與十二指腸交匯處，以止血鉗夾閉壺腹部乳頭區(qū)，將配置好的膠原酶Ⅴ從剝離好的一段膽總

3、管打入胰腺，小心剝離胰腺，38℃水浴震蕩消化16 min，手工挑取小鼠胰島。用Dispase II消化得到小鼠胰島β細胞。
　　3.將分得的胰島培養(yǎng)過夜后，用放射性免疫分析法檢測多潘立酮干預(yù)對小鼠胰島素分泌的影響。
　　4.采用鈣離子成像技術(shù)檢測多潘立酮對胰島β細胞內(nèi)鈣離子濃度的影響。
　　5.胰島培養(yǎng)過夜后，用ELISA分析法檢測多潘立酮干預(yù)對細胞內(nèi)環(huán)磷酸腺甘(cAMP)含量的影響。
　　結(jié)果：
　　1.

4、單次腹腔注射（IP）多潘立酮（DPD5mg/Kg）或DMSO溶劑后檢測IPGTT中血糖和血漿胰島素濃度，結(jié)果提示多潘立酮增強了葡萄糖刺激的胰島素釋放，并且在30分鐘時濃度較對照組顯著升高（n=6 P<0.05）。多潘立酮組血糖值在多個時點（5-60分）較對照組有升高趨勢，但無統(tǒng)計學差異。
　　2.在離體胰島素分泌實驗中，高糖（16.7mM）時多潘立酮對分離的胰島有促胰島素分泌作用，并且其促分泌作用隨著藥物濃度的增加而呈現(xiàn)逐漸加強趨

5、勢。低糖（2.8mM）時多潘立酮沒有促胰島素分泌作用。因而，在除外在體實驗中其他機制參與的情況下，該實驗證實了即刻作用后多潘立酮可以增強葡萄糖刺激的胰島素分泌（GSIS）。
　　3.鈣離子成像技術(shù)顯示，在16.7mM葡萄糖的基礎(chǔ)上，多潘立酮可進一步升高β細胞內(nèi)的鈣離子濃度和鈣離子振蕩頻率。
　　4.在高糖環(huán)境下（16.7mM）孵育小鼠胰島，較溶劑對照組，多潘立酮可顯著增加胰島β細胞內(nèi)的cAMP含量，高糖+溶劑對照組(n=12