PTH對(duì)小鼠胰島素分泌功能的影響及可能機(jī)制.pdf

1、目的：
　　通過葡萄糖刺激胰島素分泌（GSIS）實(shí)驗(yàn)觀察甲狀旁腺激素（PTH1-34）對(duì)原代C57小鼠胰島分泌功能的影響。并通過檢測(cè)胰島細(xì)胞內(nèi)cAMP含量以及鈣成像技術(shù)檢測(cè)胰島細(xì)胞內(nèi)鈣離子含量探究其可能的作用機(jī)制。
　　方法：
　　膠原酶V消化原代C57小鼠胰腺,手工挑取胰島，本實(shí)驗(yàn)可分為甲狀旁腺激素組（PTH組）和溶劑對(duì)照組（Con組），觀察甲狀旁腺激素（PTH1-34）作用于C57小鼠胰島后在低糖（2.8mM）和高

2、糖（16.7mM）下胰島素分泌量的變化。為探究其可能作用機(jī)制，行鈣成像技術(shù)探究與鈣的關(guān)系，并通過檢測(cè)胰島細(xì)胞內(nèi)cAMP含量研究胰島素分泌與cAMP之間的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　?。?）本實(shí)驗(yàn)獲得的胰島為圓形、橢圓形的實(shí)心顆粒，邊界清楚，沒有毛刺。每只原代c57小鼠約可獲得90-140個(gè)胰島。
　　（2）通過PTH1-34誘導(dǎo)的體外胰島素分泌實(shí)驗(yàn)，測(cè)得孵育液中Ca濃度為1mM時(shí)胰島素總量后可得到：2.8mM葡萄糖情況下Co

3、n組與PTH組(PTH1-34濃度分別為0.1ug/ml、1 ug/ml、10ug/ml)胰島素分泌量分別是：(5.28±0.57)uIU/ml、(1.81±0.16)uIU/ml、(2.28±0.27)uIU/ml、(2.83±0.54)uIU/ml;可見低糖時(shí) PTH組胰島素總量明顯低于Con組，P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；16.7mM葡萄糖情況下Con組與PTH組(PTH濃度分別為0.1ug/ml、1 ug/ml、10ug/

4、ml)胰島素分泌量分別是（49.66±5.97）uIU/ml、(37.45±1.84)uIU/ml、(30.96±2.88)uIU/ml、(30.70±2.33)uIU/ml，PTH組胰島素總量顯著低于Con組，P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；16.7mM葡萄糖的 Con組胰島素總量顯著高于2.8mM葡萄糖的Con組，P<0.001。也間接證明了本實(shí)驗(yàn)所獲胰島功能良好。而孵育液中Ca濃度為2.5mM時(shí)測(cè)得胰島素含量為：2.8mM葡萄糖

5、情況下Con組與PTH組(PTH1-34濃度分別為0.1ug/ml、1 ug/ml、10ug/ml)胰島素分泌量分別是：(2.72±0.75)uIU/ml、(2.31±0.56)uIU/ml、(2.91±0.74)uIU/ml、(3.74±0.43)uIU/ml;16.7mM葡萄糖情況下Con組與PTH組(PTH濃度分別為0.1ug/ml、1 ug/ml、10ug/ml)胰島素分泌量分別是（30.98±3.63）uIU/ml、(35.6

6、9±4.29)uIU/ml、(31.38±6.18)uIU/ml、(32.90±2.07)uIU/ml，可見增加鈣離子濃度到正常時(shí)，PTH對(duì)胰島素分泌無(wú)明顯影響。16.7mM葡萄糖的 Con組胰島素總量顯著高于2.8mM葡萄糖的Con組，P<0.001。
　?。?）通過鈣成像技術(shù)發(fā)現(xiàn):16.7mM組和16.7mM+PTH組的Ration of Fura2(340/380)分別為（0.52±0.01）、（0.80±0.03），16.

7、7mM+PTH組Ration of Fura2(340/380)顯著高于16.7mM組，P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　?。?）16.7mM組、16.7mM+PTH組以及16.7mM+Forskolin組胰島經(jīng)粉碎后細(xì)胞內(nèi)cAMP含量分別為（0.19±0.02）nmol/L、（0.22±0.03）nmol/L、（0.45±0.11） nmol/L，16.7mM+PTH組與16.7mM組相比，無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；16.7mM+F

8、orskolin組cAMP含量顯著高于16.7mM組，P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，間接證明了本實(shí)驗(yàn)胰島功能良好。
　　結(jié)論：
　?。?)采用膠原酶V消化胰腺以及手工挑取獲得的胰島純度高,活性以及功能良好。
　?。?）與低糖相比，高糖條件下胰島素分泌顯著增多。
　　（3）低糖和高糖條件下，PTH對(duì)胰島素分泌具有抑制作用。
　?。?）甲狀旁腺激素(PTH1-34)對(duì)胰島素分泌的抑制作用與胰島細(xì)胞內(nèi)cAMP