Ghrelin對大鼠離體胰腺胰島素分泌及Glut-2表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　 隨著生活水平提高，全球2型糖尿病發(fā)病率逐年增高，胰島素分泌不足和胰島素抵抗被認(rèn)為是引起2型糖尿病的主要原因，GLUT2作為一種葡萄糖感受器，能夠有效調(diào)節(jié)血糖濃度，密切參與了葡萄糖誘導(dǎo)的胰島素分泌，而肥胖則是引起胰島素抵抗的重要危險(xiǎn)因素。近來研究發(fā)現(xiàn)Ghrelin與肥胖及胰島素抵抗有著密切關(guān)聯(lián)。Ghrelin是1999年Kojima等從大鼠胃組織中分離和純化出的的小分子活性肽，由28個(gè)氨基酸組成，是第一個(gè)生長激素促分

2、泌物受體(GHS-R)的內(nèi)源性配體。Ghrelin主要由胃底的X/A樣細(xì)胞分泌，可以調(diào)節(jié)進(jìn)食和脂類代謝，對能量代謝平衡起著重要作用。多種研究顯示Ghrelin與肥胖、胰島素抵抗和空腹胰島素水平呈負(fù)相關(guān)，且胃減容術(shù)后血漿Ghrelin濃度發(fā)生顯著改變，體重明顯下降，對血糖的調(diào)控明顯改善。推測控制肥胖及胰島素抵抗的機(jī)制可能與Ghrelin的調(diào)節(jié)有關(guān)。
　　 大鼠離體胰腺灌注技術(shù)由于排除了體內(nèi)多種激素及高級中樞的負(fù)反饋干擾，有利于較準(zhǔn)

3、確地評估胰島β細(xì)胞功能。然而由于所需設(shè)備耗費(fèi)較高，分離胰腺十二指腸過程復(fù)雜，且胰腺對于缺血缺氧耐受較差，保持離體胰腺活性較為困難，故少有研究者應(yīng)用大鼠離體胰腺模型進(jìn)行Ghrelin的相關(guān)研究。本實(shí)驗(yàn)用離體胰腺灌流模型，給予不同濃度的Ghrelin灌流后，觀察離體胰腺胰島素分泌以及Glut-2表達(dá)的變化，研究Ghrelin對于離體胰腺的直接作用。
　　 方法：
　　 雄性Wistar大鼠25只，180-200g，隨機(jī)分組，

4、對照組5只，高脂肥胖組20只。用高脂飲食Wistar大鼠作為研究對象，以正常Wistar大鼠作為正常對照，高脂肥胖組自由飲水進(jìn)食7 d后喂養(yǎng)D12492超高脂飼料(59.9％脂肪、20％蛋白質(zhì)、20.1％碳水化合物)，對照組以普通飲食喂養(yǎng)，12周后測量各組大鼠體質(zhì)量、腹腔脂肪質(zhì)量、體脂比及口服葡萄糖耐量。建立大鼠離體胰腺灌注模型，經(jīng)腹主動(dòng)脈遠(yuǎn)端依次灌流低糖、高糖濃度溶液或加入不同濃度Ghrelin(10-8mmol/L，10-9mmol

5、/L，10-10mmol/L)的高糖濃度溶液。收集門脈流出液，ELISA測定門脈流出液的胰島素含量，免疫組化定量Glut-2在不同組間胰腺中的表達(dá)，透射電鏡觀察胰島β細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)改變。應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對結(jié)果進(jìn)行分析。對指標(biāo)的檢測數(shù)據(jù)分別進(jìn)行t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。檢驗(yàn)Ghrelin對離體胰腺胰島素分泌以及Glut-2表達(dá)變化的影響。
　　 結(jié)果：
　　 一、各組大鼠體質(zhì)量、腹腔脂肪質(zhì)量及體

6、脂比
　　 高脂肥胖組大鼠與對照組大鼠在喂養(yǎng)期間體重差距逐漸增大，喂養(yǎng)第12周末正常對照組體重增加到(449.0±18.22)g，高脂飼料組增加到(475.7±24.63)g，兩組的最終體重差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 二、口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(OGTT)結(jié)果
　　 OGTT各點(diǎn)高脂肥胖組大鼠血糖都高于對照組；高脂肥胖組大鼠空腹血糖與正常對照組無差別，30min和60 min及120min血糖均高于正

7、常對照組。OGTT葡萄糖曲線下面積，對照組為13.39±0.36，高脂肥胖組為15.87±1.11，組間差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。HOMA-IR及HOMA-β組間未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 三、Ghrelin對大鼠離體胰腺胰島素釋放的影響
　　 Ghrelin不同濃度均可以促進(jìn)高糖刺激下離體胰腺胰島素的釋放，尤以第一時(shí)相和第二時(shí)相分泌高峰作用最為明顯，Ghrelin10-8mol/L作用最為明顯，對照單純高糖灌

8、注組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，Ghrelin10-9mol/L，Ghrelin10-10mol/L相互對照無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 四、各組胰腺病理形態(tài)改變及免疫組化比較
　　 HE染色光鏡下觀察各組。正常對照組：胰島淺染，邊界清晰，形態(tài)規(guī)則，較接近圓形。高倍鏡下，胞漿豐富，細(xì)胞界限清晰，細(xì)胞間可見毛細(xì)血管存在。高脂肥胖組：胰島面積變小，形態(tài)極度不規(guī)則。高倍鏡下，胰島失去正常結(jié)構(gòu)，胰島細(xì)胞數(shù)量顯著減少，胞漿萎縮。免疫

9、組化顯示高脂肥胖組胰島中Glut-2染色陽性面積及平均光密度均顯著低于對照組。高脂肥胖組中Ghrelin組對照單純高糖灌注組Clut-2染色陽性面積及平均光密度均顯著降低。
　　 五、透射電鏡觀察各組胰腺形態(tài)改變
　　 高脂肥胖組呈不同程度的調(diào)亡征象：β細(xì)胞核膜擴(kuò)張，細(xì)胞線數(shù)量減少，部分腫脹，線粒體嵴和基質(zhì)溶解，部分形成空泡。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張；完整的分泌顆粒數(shù)量顯著減少，且多數(shù)已失去了正常的形態(tài)特征。高爾基體囊泡擴(kuò)張，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)

10、結(jié)構(gòu)密度增大；少數(shù)細(xì)胞可見核固縮，染色質(zhì)邊集，胞漿濃縮，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)疏松并與胞膜融合形成空泡，高脂肥胖組中Ghrelin組細(xì)胞器損害程度明顯減輕：β細(xì)胞內(nèi)有大小不等被由單層界膜包繞的空泡，含致密核芯的分泌顆粒數(shù)量減少。部分β細(xì)胞核輕度變性，胞漿內(nèi)也存在少量的空泡變性，核周間隙擴(kuò)張。線粒體結(jié)構(gòu)大致正常，高爾基體輕度擴(kuò)張。
　　 結(jié)論：
　　 1、在大鼠離體胰腺中，Ghrelin促進(jìn)高濃度葡萄糖誘導(dǎo)的胰島素分泌。
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