核酸適配體檢測CFP10--ESAT6融合蛋白的研究.pdf

1、結(jié)核分枝桿菌在生長的過程中會(huì)分泌多種胞外蛋白，其中CFP10和ESAT6這兩種蛋白是結(jié)核分枝桿菌分泌的特異性的蛋白，并且兩者會(huì)以一定的比例結(jié)合在一起。本論文研究利用核酸適配體檢測結(jié)核分枝桿菌分泌的融合蛋白CFP10-ESAT6。以羧基化的磁性納米粒子作為載體并加入氨基化的核酸適配體，通過熒光檢測法、SDS凝膠電泳法、互補(bǔ)鏈結(jié)合法等不同的方法確定了磁性納米粒子和適配體的比例。
　　綠色熒光嵌入染料EVA Green在雙鏈DNA溶液中

2、可發(fā)出強(qiáng)烈的熒光，在單鏈DNA中熒光強(qiáng)度很微弱。預(yù)先培養(yǎng)結(jié)核分枝桿菌并取適量結(jié)核分枝桿菌的菌液，加入到磁性納米粒子、dsDNA、綠色熒光染料EVA Green反應(yīng)形成的體系中，若核酸適配體和目標(biāo)物具有特異性，則已形成的雙鏈DNA會(huì)轉(zhuǎn)變?yōu)閱捂淒NA，從而利用EVAGreen的熒光變化來驗(yàn)證核酸適配體和融合蛋白CFP10-ESAT6的特異性。由于蛋白質(zhì)中含有酪氨酸和色氨酸，所以蛋白質(zhì)會(huì)在280nm處出現(xiàn)紫外吸收峰，因此采用紫外吸收法對菌液中

3、的目標(biāo)蛋白CFP10-ESAT6進(jìn)行了粗略的定量。因此這部分實(shí)驗(yàn)欲達(dá)到對結(jié)核病早期診斷的目的。
　　聚乳酸是一種生物醫(yī)學(xué)材料，由于其具有表面多孔性及其生物兼容性，因此被廣泛應(yīng)用于藥品的負(fù)載與運(yùn)輸中。利福平是一種應(yīng)用最廣泛的抗結(jié)核藥物。這部分實(shí)驗(yàn)我們制備了聚乳酸負(fù)載利福平的微球，測得其產(chǎn)率、負(fù)載量、包封率分別為63.56％，13％，20.35％，并在后期加入了熒光物FAM修飾的核酸適配體，聚乳酸、利福平、熒光化的適配體可形成一個(gè)復(fù)合