胎兒脊柱裂幾種常見病因機(jī)制探究.pdf

1、目的:脊柱裂是神經(jīng)管缺陷的一個(gè)臨床類型，發(fā)病機(jī)制尚不明確。本課題通過對(duì)當(dāng)?shù)匾恍┽t(yī)院（河北省承德市中心醫(yī)院、河北省承德市附屬醫(yī)院，河北省266醫(yī)院及河北省婦幼保健院）胎兒脊柱裂的發(fā)病情況進(jìn)行臨床統(tǒng)計(jì)和走訪分析工作，根據(jù)統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果選取三種有可能引起胎兒脊柱裂的可控制因素，以大鼠為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，運(yùn)用二維超聲定位技術(shù)觀察研究這三種因素對(duì)胎兒脊柱發(fā)育過程的影響程度，并進(jìn)一步利用分子生物學(xué)手段檢測與神經(jīng)干細(xì)胞的增殖、分化相關(guān)聯(lián)的巢蛋白(nestin)

2、在我們選取的三種誘導(dǎo)因素下的表達(dá)峰度變化，希望深入探索可能誘發(fā)胎兒脊柱裂的病因及其分子機(jī)制。最后，利用我們的研究結(jié)果來正確引導(dǎo)孕婦做好預(yù)防胎兒脊柱裂發(fā)生的防治工作，可以大大降低妊娠期胎兒脊柱裂的發(fā)病率，從而更好的讓醫(yī)學(xué)成果為人類服務(wù)。
　　方法:脊柱裂是一種先天畸形，目前已成為影響新出生兒致死或致殘的主要原因之一。本課題對(duì)河北省承德市中心醫(yī)院、河北省承德市附屬醫(yī)院，河北省266醫(yī)院以及河北省婦幼保健院自2011年到2014年間超聲

3、檢查出的胎兒脊柱裂發(fā)病率進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，以醫(yī)院臨床樣本為基礎(chǔ)進(jìn)行初步的資料采集，進(jìn)一步采取隨機(jī)抽樣方式選擇其中1/2比例的病人進(jìn)行走訪工作，走訪過程中，詳細(xì)咨詢并嚴(yán)格填寫事先編排的可能誘導(dǎo)脊柱裂因素的表格。另外鑒于數(shù)據(jù)收集分析的嚴(yán)謹(jǐn)性和可參照性，我們也隨機(jī)走訪了相同數(shù)目的正常孕婦，以便后面數(shù)據(jù)的對(duì)比分析。根據(jù)研究報(bào)道，目前較為普遍的觀點(diǎn)認(rèn)為絕大多數(shù)胎兒脊柱裂是遺傳因素與環(huán)境因素相互作用的結(jié)果，強(qiáng)調(diào)多基因遺傳的基礎(chǔ)上，胚胎在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程

4、中遇到各種外界環(huán)境致畸因素所引起。我們將調(diào)查研究的具體項(xiàng)目可分為兩類:一是遺傳學(xué)因素，如產(chǎn)婦既往有無出生缺陷史或家庭畸形史;二是環(huán)境因素，如妊娠期前后孕婦的飲食情況、運(yùn)動(dòng)量、情緒變化，以及孕婦夫妻職業(yè)等，另外歸納統(tǒng)計(jì)各年齡段孕婦和妊娠時(shí)間，以期望得到一些可供預(yù)測的因素。通過統(tǒng)計(jì)分析走訪調(diào)查結(jié)果，選擇其中與胎兒脊柱裂相關(guān)性最大的三種可控制的因素，以大鼠為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停O(shè)計(jì)誘導(dǎo)檢測實(shí)驗(yàn):將40只大鼠分為4組，每組10只大鼠，其中三組作為實(shí)驗(yàn)組進(jìn)

5、行不同條件的誘導(dǎo)處理，另外一組正常飼養(yǎng)作為對(duì)照組，定期運(yùn)用二維超聲定位技術(shù)觀察檢測不同誘導(dǎo)條件下大鼠胎兒脊柱發(fā)育情況。獲得的初步結(jié)果后繼續(xù)運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，分析這三種因素對(duì)大鼠胎兒脊柱發(fā)育的影響程度，首先通過主成分分析方法和卡方檢驗(yàn)定性法來檢測這三種因素的設(shè)計(jì)是否符合統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，進(jìn)一步運(yùn)用方差分析方法和相關(guān)性檢測這三種因素對(duì)胎兒脊柱發(fā)育過程影響的穩(wěn)定相關(guān)性。另外根據(jù)前期的研究報(bào)道在神經(jīng)胚開始形成，神經(jīng)干細(xì)胞增殖時(shí)，巢蛋白(nestin)的

6、表達(dá)水平隨著神經(jīng)細(xì)胞的遷移分化而變化，當(dāng)神經(jīng)干細(xì)胞逐漸向祖細(xì)胞分化，巢蛋白的表達(dá)水平逐漸減弱，當(dāng)神經(jīng)細(xì)胞遷移完成、并且出現(xiàn)明顯分化特征時(shí)，巢蛋白的表達(dá)將完全停止，并被其它中間纖維蛋白所取代，這表明巢蛋白的表達(dá)與神經(jīng)干細(xì)胞的增殖、分化有關(guān)。我們推測某種因素可能影響著巢蛋白的表達(dá)，進(jìn)而通過不同蛋白質(zhì)分子間的調(diào)控作用影響著胎兒脊柱的發(fā)育過程。我們?cè)O(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn):根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，在大鼠懷孕10 d左右巢蛋白的表達(dá)豐度最高，因此本實(shí)驗(yàn)選取懷孕10d

7、的孕鼠拿來進(jìn)行研究分析。我們將40只大鼠分為4組，每組10只大鼠，其中三組作為實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行不同條件的誘導(dǎo)處理，另外一組正常飼養(yǎng)作為對(duì)照組，在大鼠懷孕期十天時(shí)，在相同的時(shí)間下分離獲取胎鼠神經(jīng)干細(xì)胞。將獲取的胎鼠神經(jīng)干細(xì)胞進(jìn)行超聲破碎裂解，收集全細(xì)胞裂解液，統(tǒng)一標(biāo)定到相同的總蛋白濃度，用western blot檢測技術(shù)定量分析測定不同組胎鼠神經(jīng)干細(xì)胞內(nèi)巢蛋白在蛋白質(zhì)水平上的表達(dá)差異，以actin做內(nèi)參，運(yùn)用Image J軟件定量計(jì)算出巢蛋白表

8、達(dá)量，即可推測某種因素可能影響著巢蛋白的表達(dá)情況，預(yù)測三種因素對(duì)出現(xiàn)胎兒脊柱裂的影響，進(jìn)而從分子機(jī)理來探索胎兒脊柱裂的發(fā)病原因。
　　結(jié)果:自2011年到2014年間超聲檢查出脊柱裂（顯性）的胎兒為79例，占總調(diào)查出生人口的3％0，且逐年有下降的趨勢，接下來對(duì)隨機(jī)選中的38例胎兒家庭進(jìn)行走訪工作，結(jié)果表明其中有8例是家族成員中曾出現(xiàn)過神經(jīng)管缺陷癥的患病者，有12例是母親懷孕時(shí)年齡已經(jīng)超過35歲，還有4例是夫妻雙方或者其中一方的工作

9、環(huán)境中的空氣極其惡劣，如某些化工廠、煤廠之類的工作場所，有10例是母親的懷孕時(shí)間在仲夏高溫時(shí)期，有3例的母親在妊娠期有摔傷或碰撞硬物的經(jīng)歷，有5例是母親在懷孕前或者懷孕后服用過避孕藥，有2例的母親在妊娠期有食用煙酒經(jīng)歷，最后還有4例并沒有經(jīng)歷過我們所調(diào)研項(xiàng)目的情況。通過以上走訪結(jié)果，我們可以認(rèn)識(shí)到隨著近幾年孕期防護(hù)科學(xué)知識(shí)的大量宣傳，以及政府醫(yī)療機(jī)構(gòu)對(duì)孕婦適當(dāng)補(bǔ)充葉酸后，胎兒脊柱裂患者的數(shù)目逐年減少。同時(shí)，結(jié)果也表明高齡產(chǎn)婦、孕期如是高