生物法合成香蘭素和香草酸的研究.pdf

1、生物法合成香蘭素和香草酸，具有污染少、生產(chǎn)清潔、安全，副產(chǎn)物無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn)，已越來(lái)越受到人們的重視。國(guó)外很多公司都紛紛加強(qiáng)了對(duì)生物法生產(chǎn)香蘭素和香草酸的研究，我國(guó)在這方面尚處于起步階段，因此有必要加大合作研究的力度，以使我國(guó)在生物合成香蘭素市場(chǎng)上能占有一席之地。
　　 本文主要對(duì)酶轉(zhuǎn)化法和微生物轉(zhuǎn)化的方法轉(zhuǎn)化異丁香酚或者阿魏酸生產(chǎn)香草酸和香蘭素進(jìn)行了研究。
　　 1、經(jīng)過(guò)重復(fù)試驗(yàn)確定，實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的幾種脂肪酶Novozyme

2、435，Candidasp.99-125脂肪酶，LipozymeTLIM，LipozymeRMIM并不能夠催化異丁香酚轉(zhuǎn)化生成香蘭素，因此，在從異丁香酚到香蘭素的轉(zhuǎn)化過(guò)程中可能并不存在酯化或者轉(zhuǎn)酯化反應(yīng)；
　　 2、提取得到的大豆脂氧合酶LOX酶活不高，且在低溫下(20℃)相對(duì)比較穩(wěn)定，當(dāng)用LOX粗提液或者用共沉淀法制得的酶粉催化異丁香酚反應(yīng)時(shí)，間隔取樣，測(cè)定，沒(méi)有新峰出現(xiàn)，底物異丁香酚也沒(méi)有消耗，說(shuō)明該反應(yīng)體系仍然存在問(wèn)題，因

3、此需要從微生物中尋找合適的酶；
　　 3、在轉(zhuǎn)化異丁香酚生產(chǎn)香草酸和香蘭素的菌株篩選實(shí)驗(yàn)中，最初篩到3株可以產(chǎn)香蘭素的鏈狀菌株，但是香蘭素的產(chǎn)量非常低，進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)，3株菌的發(fā)酵液中均未檢測(cè)到香蘭素的生成，這可能是所篩到的菌株性狀不穩(wěn)定，使得其轉(zhuǎn)化異丁香酚生成香蘭素的能力下降：同時(shí)，異丁香酚對(duì)菌體有毒性作用，且在發(fā)酵液反應(yīng)過(guò)程中容易出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，使得微生物酶不能和底物更好接觸，不利于反應(yīng)的進(jìn)行，因此選用對(duì)微生物毒性相對(duì)較小的阿魏

4、酸為底物進(jìn)行篩選；
　　 4、在轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香草酸和香蘭素的菌株篩選實(shí)驗(yàn)中，篩選到一菌株StrainAl，在未優(yōu)化反應(yīng)條件的情況下，該菌株經(jīng)27h即可將1g/L阿魏酸轉(zhuǎn)化反應(yīng)生成0.36g/L香草酸，其相應(yīng)的摩爾轉(zhuǎn)化率為41.6％；
　　 5、對(duì)鏈霉菌Streptomyces2036進(jìn)行紫外誘變，復(fù)篩，僅有微量香蘭素生成，濃度約為2.1mg/L，但該菌株可以在短時(shí)間內(nèi)轉(zhuǎn)化阿魏酸生成香草酸；
　　 6、鏈霉菌St