白楊素對(duì)機(jī)械性創(chuàng)傷導(dǎo)致的大鼠繼發(fā)性心肌損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的:
　　中重度的機(jī)械創(chuàng)傷(MT)可以引起心肌細(xì)胞凋亡從而造成心臟功能降低，很多研究表明MT可以導(dǎo)致機(jī)體強(qiáng)烈的氧化應(yīng)激反應(yīng)和大量細(xì)胞炎性因子的釋放。其中腫瘤壞死因子（TNF-α）的過(guò)量產(chǎn)生是引起心肌細(xì)胞凋亡的最主要的原因。白楊素是一種天然存在的黃酮類化合物，主要存在于蜂膠、西番蓮屬植物和水果中。一些研究表明白楊素具有抗氧化、抗炎等多種生物學(xué)活性。本研究目的是觀察白楊素能否能夠改善MT導(dǎo)致的繼發(fā)性心臟損傷，并從體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)探討其

2、可能的作用機(jī)制。
　　方法:
　　用MTT法測(cè)定了不同白楊素濃度對(duì)正常細(xì)胞的作用和在TNF-α誘導(dǎo)下對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用，并確定了最合適的藥物濃度。通過(guò)右頸總動(dòng)脈插管實(shí)驗(yàn)，用BL-420生物信號(hào)分析系統(tǒng)記錄大鼠左心室收縮壓(LVSP)、左心室舒張期末壓(LVEDP)、平均動(dòng)脈壓(MAP)左心室最大上升速率(+dP/dTmax)、左心室最大下降速率（-dP/dTmax）等指標(biāo)。制備心肌組織冰凍切片，用TUNEL染色，在熒光顯微鏡下

3、拍照并計(jì)算心肌組織的凋亡情況。用ELISA法檢測(cè)了體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)中的TNF-α的含量。用DCFH-DA法檢測(cè)單核細(xì)胞和心肌細(xì)胞內(nèi)活性氧的含量，DCFH-DA染料是一種非極性化合物可以進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞內(nèi)的氧化物可以使DCFH-DA變?yōu)楦邿晒饣衔顳CF。用激光共聚焦發(fā)測(cè)定心肌細(xì)胞內(nèi)鈣的熒光強(qiáng)度。
　　結(jié)果:
　　1.用200轉(zhuǎn)創(chuàng)傷模型可以造成大鼠心功能降低
　　與假創(chuàng)傷組相比，創(chuàng)傷200轉(zhuǎn)大鼠心功能各指標(biāo)LVDP、MAP

4、、+dP/dTmax、-dP/dTmax均顯著降低。
　　2.確定了體外實(shí)驗(yàn)白楊素最合適的藥物濃度
　　與對(duì)照組相比，分別用20uM、40uM或80uM白楊素藥物濃度孵育正常的心肌細(xì)胞，細(xì)胞存活率呈劑量依賴性地降低，而用10 uM的藥物濃度孵育，細(xì)胞存活率沒(méi)有顯著變化。用TNF-α誘導(dǎo)細(xì)胞炎癥反應(yīng)引起細(xì)胞存活率顯著降低，與TNF-α組相比，事先孵育白楊素組的細(xì)胞存活率顯著升高。
　　3.白楊素可以改善創(chuàng)傷后大鼠心臟損傷

5、
　　與假創(chuàng)傷組相比，心功能各指標(biāo)LVDP、MAP、+dP/dTmax、-dP/dTmax均明顯下降，而白楊素藥物干預(yù)組心功能各指標(biāo)均明顯升高。
　　4.白楊素可以減少創(chuàng)傷后大鼠心肌組織的凋亡
　　與假創(chuàng)傷組相比，創(chuàng)傷組心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯升高。與創(chuàng)傷組相比，白楊素藥物干預(yù)組心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著降低。
　　5.白楊素可以降低創(chuàng)傷血漿中和LPS誘導(dǎo)的TNF-α的含量
　　與假創(chuàng)傷組比，創(chuàng)傷血漿組TNF-α的含

6、量明顯上升。與創(chuàng)傷組相比，創(chuàng)傷給藥組血漿中TNF-α的含量明顯下降。與對(duì)照組相比，LPS組TNF-α的含量顯著升高。與LPS組相比，創(chuàng)傷給藥組TNF-α的含量明顯下降。
　　6.白楊素可以降低LPS誘導(dǎo)單核細(xì)胞和TNF-α介導(dǎo)心肌細(xì)胞活性氧的水平
　　與對(duì)照組相比，用LPS誘導(dǎo)細(xì)胞炎癥反應(yīng)單核細(xì)胞內(nèi)活性氧水平顯著升高。與LPS組相比，用LPS孵育前給予白楊素細(xì)胞內(nèi)活性氧水平顯著下降。與對(duì)照組相比，心肌細(xì)胞TNF-α組活性氧水

7、平顯著上升。與TNF-α組相比，用TNF-α孵育前給予白楊素細(xì)胞內(nèi)活性氧水平顯著下降。
　　7.白楊素可以降低創(chuàng)傷血漿引起的心肌細(xì)胞內(nèi)鈣超載
　　與正常組相比，創(chuàng)傷血漿組Ca2+的熒光強(qiáng)度明顯上升。與創(chuàng)傷血漿組相比，創(chuàng)傷給藥組Ca2+熒光強(qiáng)度明顯減弱
　　結(jié)論:
　　以上研究結(jié)果表明白楊素通過(guò)減輕MT導(dǎo)致的機(jī)體TNF-α和活性氧的大量產(chǎn)生，減少心肌細(xì)胞內(nèi)的氧化應(yīng)激損傷、降低心肌細(xì)胞鈣超載，從而緩解MT造成的心肌細(xì)