藤梨根提取物抗膽管癌作用的體內(nèi)外實驗研究.pdf

1、目的:
　　膽管癌是起源于膽管上皮細胞的惡性腫瘤。近年來，其發(fā)病率在全球范圍內(nèi)呈上升趨勢。其惡性程度高，發(fā)病隱匿，大多數(shù)患者在確診時已喪失手術(shù)機會，且該病對放、化療不敏感。因此臨床迫切需要探討對膽管癌更為有效的治療方法。藤梨根具有清熱解毒、消腫疥、祛風(fēng)濕的功效。是臨床上常用于抗腫瘤治療的中草藥，尤其對消化道腫瘤療效較佳。近年體內(nèi)外實驗研究發(fā)現(xiàn)，藤梨根制劑對多種腫瘤有抑制作用，可通過多種途徑發(fā)揮抗腫瘤作用，其藥理研究和臨床驗證受到廣

2、泛關(guān)注。有關(guān)藤梨根提取物(Radix Actinidia Extractive，RAE)對膽管癌的作用尚未見報道。
　　本研究以人膽管癌細胞株QBC939細胞作為研究對象，采用MTS法、流式細胞術(shù)、形態(tài)學(xué)觀察、Western blot及裸鼠移植瘤生長抑制作用實驗等方法，觀察RAE對人膽管癌細胞的生長抑制作用和凋亡誘導(dǎo)作用以及凋亡相關(guān)蛋白的表達情況，并觀察RAE對QBC939細胞裸鼠移植瘤的生長抑制作用。
　　材料和方法:

3、r>　　體外培養(yǎng)人膽管癌QBC939細胞，取對數(shù)生長期細胞用于實驗。將RAE用DMEM培養(yǎng)基稀釋成低濃度組(1.25mg/ml)，中濃度組(2.5mg/ml)和高濃度組(5mg/ml)。采用MTS法檢測不同濃度的RAE對QBC939細胞存活率的影響，及高濃度組RAE作用于QBC939細胞12h，24h，36h及48h對細胞存活率的影響;采用流式細胞術(shù)檢測不同濃度組RAE對QBC939細胞的凋亡誘導(dǎo)作用;采用普通光學(xué)顯微鏡觀察RAE處理前

4、后細胞的形態(tài)學(xué)變化;采用Hoechst33342染色法觀察RAE處理前后細胞核的染色情況;采用Western blot法檢測RAE作用前后QBC939細胞Caspase-8，Caspase-3，cleaved-PARP，Survivin和Mcl-1蛋白的表達。建立人膽管癌QBC939細胞裸鼠皮下移植瘤模型，成瘤后隨機分為對照組和實驗組，分別每天腹腔注射生理鹽水和RAE溶液，2周后比較終術(shù)腫瘤體積。
　　結(jié)果:
　　1、MTS

5、實驗:RAE處理后的細胞存活率明顯低于對照組。細胞存活率在研究范圍內(nèi)與藥物作用濃度及作用時間成負相關(guān)。
　　2、流式細胞實驗:RAE處理后的細胞凋亡比例高于對照組。細胞凋亡比例在研究范圍內(nèi)與藥物作用濃度成正相關(guān)。
　　3、形態(tài)學(xué)觀察:隨著RAE濃度增加及作用時間延長，QBC939細胞的細胞間隙增大，細胞胞漿中顆粒增多，細胞空泡化、脫壁，細胞周圍碎片增多。Hoechst33342熒光染色觀察到RAE處理組細胞核呈現(xiàn)塊狀、濃染熒

6、光。
　　4、Western blot實驗:與對照組相比，各個濃度RAE處理組的QBC939細胞活化型Caspase-8及Caspase-3蛋白表達升高，切割的PARP蛋白表達升高。Survivin及Mcl-1蛋白表達下降。
　　5、裸鼠移植瘤生長抑制作用實驗:RAE處理組的裸鼠移植瘤終末腫瘤體積明顯小于對照組。
　　結(jié)論:
　　RAE顯著抑制QBC939細胞生長，其細胞生長抑制率與RAE濃度及作用時間呈正相關(guān)。