暹羅鱷膽汁提取物抗膽管癌細(xì)胞的作用機理研究.pdf

1、膽管癌是起源于肝內(nèi)或肝外膽管上皮的惡性膽道腫瘤。由于膽管癌的早期癥狀不明顯、發(fā)現(xiàn)困難，一旦發(fā)現(xiàn)多數(shù)已進入晚期，很難通過手術(shù)方法切除治療，因此，尋找其他非手術(shù)方法治療膽管癌就變得十分必要。目前臨床應(yīng)用的藥物對膽管癌敏感性欠佳，而且存在明顯毒副作用。因此，尋找更敏感、有效的藥物，提高膽管癌藥物治療的療效就變得十分必要。動物膽汁藥具有活性強、療效顯著、副作用小等特點，在我國傳統(tǒng)中藥中有大量應(yīng)用。近年來，動物膽汁的抗腫瘤作用備受關(guān)注，但是有關(guān)鱷

2、魚膽汁抗腫瘤活性的相關(guān)研究很少。
　　 本論文以體外培養(yǎng)的人膽管癌QBC939細(xì)胞為藥物篩選模型，從暹羅鱷膽汁中篩選獲得具有抑制膽管癌細(xì)胞生長的活性物質(zhì)，命名為鱷膽素，并進一步探討其抑制膽管癌細(xì)胞生長的作用機理。通過MTT法、細(xì)胞形態(tài)觀察法、流式細(xì)胞術(shù)等方法研究表明：鱷膽素呈時間和劑量依賴性抑制膽管癌QBC939細(xì)胞的增殖、使細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化、使細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；采用MTT法、劃痕法、Transwel

3、l細(xì)胞侵襲實驗研究了鱷膽素對膽管癌細(xì)胞遷移、侵襲和黏附能力的影響。結(jié)果表明鱷膽素對膽管癌細(xì)胞的黏附、遷移和侵襲能力均有明顯的抑制作用。通過Western blot等方法研究表明：鱷膽素下調(diào)了Bcl-2蛋白表達，促使Cytc從線粒體釋放到細(xì)胞質(zhì)中，上調(diào)了Fas蛋白的表達。推測鱷膽素能激活線粒體信號通路誘導(dǎo)QBC939細(xì)胞凋亡，和Fas/FasL信號通路也密切相關(guān)。
　　 進一步探討鱷膽素抗膽管癌作用的分子機制和藥物作用靶點，首次應(yīng)

4、用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究了鱷膽素對人膽管癌QBC939細(xì)胞全蛋白表達譜的影響。成功鑒定出激酶、RNA加工蛋白、核蛋白、膜聯(lián)蛋白和代謝相關(guān)酶等差異表達的蛋白點。結(jié)合這些蛋白的功能，分析了鱷膽素抗膽管癌作用的可能的分子機制。為鱷膽素抗膽管癌作用新靶點的闡明提供了新的思路和線索，也為膽管癌的藥物治療提供了新的線索。
　　 采用灌胃的方式，對鱷膽素進行了小鼠急性毒理實驗分析。結(jié)果顯示部分小鼠出現(xiàn)抽搐、行動呆滯等癥狀。根據(jù)改良寇氏法算出鱷膽素