鱷膽汁提取物對(duì)肝癌SMMC-7721細(xì)胞抗癌機(jī)理研究.pdf

1、肝癌是一種原發(fā)于肝臟的惡性腫瘤。目前治療肝癌的藥物大多具有較大的毒副作用，因此，尋找敏感性高且毒副作用小的肝癌治療藥物具有重要的意義。實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)鱷膽汁提取物能將肝癌細(xì)胞SMMC-7721周期阻滯于G0/G1期進(jìn)而誘導(dǎo)其凋亡，但作用機(jī)制尚未闡明。
　　 本論文以體外培養(yǎng)的人肝癌細(xì)胞SMMC-7721為對(duì)象，深入探討鱷膽汁提取物抑制肝癌發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)理。熒光定量PCR、Western blot發(fā)現(xiàn)，鱷膽汁提取物能

2、明顯抑制肝癌細(xì)胞SMMC-7721的bcl-2、c-myc、survivin、hTERT致癌基因的表達(dá)，提高bax、p53、caspase-3抑癌基因的表達(dá)。結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，鱷膽汁提取物誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)ROS的升高，bax/bcl-2比例上升導(dǎo)致線粒體膜通透性增加，凋亡因子釋放。進(jìn)而激活Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)，介導(dǎo)了p53、c-Myc、survivin參與的細(xì)胞凋亡過程。
　　 鱷膽汁提取物作用于SMMC-7721細(xì)胞前

3、后，細(xì)胞的全蛋白表達(dá)譜發(fā)生改變。蛋白雙向電泳和質(zhì)譜分析共鑒定了21種表達(dá)差異的蛋白，其中PCNA、STMN表達(dá)顯著下調(diào)。RT-PCR、Western blot實(shí)驗(yàn)證明，鱷膽汁提取物在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上抑制了PCNA、STMN的表達(dá)。本論文運(yùn)用short hair RNA干擾技術(shù)及慢病毒轉(zhuǎn)染法構(gòu)建了特異性干擾STMN的穩(wěn)定細(xì)胞系SMMC-7721-shSTMN和非特異性干擾的穩(wěn)定細(xì)胞系SMMC-7721-shCtrl。后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)STMN干

4、擾的SMMC-7721-shSTMN組增殖速度顯著低于對(duì)照組。綜上所述，STMN可能是鱷膽汁提取物抑制肝癌細(xì)胞生長的分子靶點(diǎn)之一。
　　 另外，本文從體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究了鱷膽汁提取物對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC-7721的黏附、遷移和侵襲能力的影響。細(xì)胞黏附、劃痕、Transwell等實(shí)驗(yàn)檢測發(fā)現(xiàn)鱷膽汁提取物能抑制肝癌細(xì)胞SMMC-7721的體外黏附、遷移和侵襲能力。Real-timePCR、Western blot、明膠酶譜法等方法研究表