華佗豆提取物抗瘢痕的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過(guò)對(duì)華佗豆提取物體外抗瘢痕的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，研究其對(duì)小鼠成纖維細(xì)胞（NIH3T3）和人增生瘢痕成纖維細(xì)胞（HKF）增殖的影響及對(duì)兔耳增生瘢痕的防治作用，評(píng)價(jià)華佗豆提取物的抗瘢痕作用。為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)華佗豆和研制有效的外用抗皮膚瘢痕藥物提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：1、采用系統(tǒng)溶劑提取法對(duì)華佗豆進(jìn)行提取。2、采用MTT法體外測(cè)定華佗豆提取物對(duì)小鼠成纖維細(xì)胞和人增生瘢痕成纖維細(xì)胞作用的影響。3、以一次給藥和多次給藥的方法，將

2、華佗豆70％醇提取物制成的凝膠劑及凝膠基質(zhì)分別外涂于家兔背部去毛區(qū)的完整皮膚和破損皮膚，觀察其產(chǎn)生家兔皮膚刺激性反應(yīng)。4、采用華佗豆70%醇提取物自制的凝膠劑對(duì)實(shí)驗(yàn)家兔進(jìn)行增生瘢痕的預(yù)防和治療，預(yù)防組于造模當(dāng)天用藥，術(shù)后30天耳部瘢痕取材，治療組于術(shù)后28天用藥，術(shù)后60天將動(dòng)物處死，耳部瘢痕取材，組織均用10%甲醛固定，石蠟包埋，切片，然后進(jìn)行HE染色及VG染色，大體觀察和光鏡觀察瘢痕區(qū)形態(tài)學(xué)的改變，檢測(cè)瘢痕組織的增生指數(shù)(HI)、成

3、纖維細(xì)胞數(shù)密度(NA)及膠原纖維面積密度(AA)。
　　結(jié)果：1、本實(shí)驗(yàn)采用系統(tǒng)溶劑提取法，加熱回流提取分別得到水提物、70%醇提物和95%醇提物3個(gè)提取物。2、華佗豆3種提取物對(duì)小鼠成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)均有不同程度的促進(jìn)作用，而對(duì)人增生瘢痕成纖維細(xì)胞的增殖有不同程度的抑制作用，且抑制率呈時(shí)間依賴性，兩者實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示70%醇提物對(duì)小鼠成纖維細(xì)胞促進(jìn)生長(zhǎng)的作用效果最好，且對(duì)人增生瘢痕成纖維細(xì)胞的抑制作用最強(qiáng)。3、華佗豆凝膠劑對(duì)家兔完整皮

4、膚一次用藥和多次用藥的平均反應(yīng)分值均<0.5分，表明其對(duì)家兔正常皮膚無(wú)刺激性；一次給藥對(duì)家兔破損皮膚在用藥后1h平均反應(yīng)分值為0.67分>0.5分，但<2.0分，表明其對(duì)家兔破損皮膚有輕度刺激性，但在用藥后24h后刺激性消失。多次給藥對(duì)家兔破損皮膚，在末次用藥后1h平均反應(yīng)分值為0.33分<0.5分，表明華佗豆凝膠劑對(duì)家兔破損皮膚無(wú)刺激性。4、對(duì)各組兔耳瘢痕標(biāo)本進(jìn)行觀察和分析：（1）大體觀察：不處理組及基質(zhì)組：瘢痕明顯凸起皮緣，且凹凸不

5、平，質(zhì)地較周圍組織硬，色紅。實(shí)驗(yàn)組：瘢痕略隆起于皮膚，瘢痕組織較平坦，柔軟，質(zhì)地基本同周圍組織，但局部稍硬，小部分地區(qū)色略紅。（2）光鏡下觀察：不處理組、基質(zhì)對(duì)照組瘢痕均明顯高于各自周圍正常組織，成纖維細(xì)胞數(shù)目多且密集，膠原纖維排列紊亂；實(shí)驗(yàn)組：瘢痕稍高于周圍正常組織，膠原纖維較稀疏，排列較整齊，大部分呈束狀。（3）實(shí)驗(yàn)組的增生指數(shù)HI、成纖維細(xì)胞數(shù)密度NA及膠原纖維面積密度 AA均小于不處理組和基質(zhì)對(duì)照組（p<0.01或p<0.05）