臍血干細(xì)胞移植對(duì)兔后肢動(dòng)脈內(nèi)膜損傷后修復(fù)及血清VEGF、TGF-β1水平的影響.pdf

1、目的：觀察兔后肢動(dòng)脈經(jīng)球囊擴(kuò)張?jiān)斐杉毙詣?dòng)脈內(nèi)膜缺血損傷模型后，人臍血干細(xì)胞局部移植（human cord blood stem cell transplantation， HCBSCT）對(duì)兔血清中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（ vascular endothelial growth factor，VEGF）及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（transforming growth factor beta-1， TGF-β1）水平的影響和損傷血管組織病理學(xué)變化，探

2、討臍血干細(xì)胞移植對(duì)防治血管成形術(shù)后再狹窄的可能機(jī)制。
　　方法：
　　1.2014年12月至2015年2月，新西蘭大白兔18只隨機(jī)分入對(duì)照組（A組，n=6）、單純球囊損傷組（B組，n=6），及球囊損傷+人臍血干細(xì)胞移植組（C組，n=6）。采用Ficoll密度梯度離心法分離制備人臍血單個(gè)核細(xì)胞懸液，分離后在2小時(shí)內(nèi)用完。
　　2.A組僅分離暴露左側(cè)后肢動(dòng)脈，穿刺局部注入0.5ml磷酸鹽緩沖液（PBS緩沖液），標(biāo)記后閉合傷

3、口；C組行動(dòng)脈分離后，夾閉暴露的動(dòng)脈兩端，穿刺成功以3.0mm×40mm球囊進(jìn)行局部擴(kuò)張并間斷牽拉，每次30s，共3次，成功制備急性動(dòng)脈內(nèi)膜缺血損傷模型后，經(jīng)球囊導(dǎo)管注入臍血干細(xì)胞懸液0.5ml(2×106個(gè))于后肢動(dòng)脈損傷局部，緩慢撤出球囊，縫合穿刺位點(diǎn)，約20min后撤去損傷動(dòng)脈兩端的血管夾，恢復(fù)血供；B組經(jīng)同樣方法介入操作后，注入等體積的PBS緩沖液；術(shù)畢均予逐層縫合閉合傷口。
　　3.分別于術(shù)前、術(shù)后7d及術(shù)后14d經(jīng)耳中

4、央動(dòng)脈各采血3.0ml，經(jīng)高速離心分離獲得血清，采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）分別測(cè)定三組VEGF及TGF-β1水平；實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)留取局部血管組織進(jìn)行蘇木素-伊紅染色，觀察三組干預(yù)后血管內(nèi)膜及中膜病理變化表現(xiàn)。
　　4.應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件及Graph Pad Prism5.0版統(tǒng)計(jì)繪圖軟件對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料以x±s表示，干預(yù)前后比較采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，組間比較采用均數(shù)方差分析，雙變量之間關(guān)系采用線性相

5、關(guān)回歸分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果：
　　1.術(shù)前VEGF水平A、B、C三組組間比較無(wú)顯著性差異（F=0.000， P=0.978>0.05）；術(shù)后7d B組較 A組 VEGF水平明顯增高（t=2.286， P=0.045<0.05），C組較A、B兩組均明顯增高（t=6.196，P=0.000<0.05；t=2.336，P=0.042<0.05）；術(shù)后14d VEGF水平 B組與A組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意

6、義（t=1.294，P=0.225>0.05），C組較A、B兩組仍顯著增高（t=6.738， P=0.000<0.05；t=2.641，P=0.038<0.05）。
　　2.術(shù)前 TGF-β1水平 A、B、C三組比較組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=0.003，P=0.997>0.05）；術(shù)后7d TGF-β1水平B組較A組明顯增高（t=9.052，P=0.000<0.05），C組較A組增高，但明顯低于B組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.6

7、75，P=0.023<0.05；t=3.104，P=0.011<0.05）；術(shù)后14d B組與A組比較仍增高（t=3.443，P=0.006<0.05），而C組與B組比較顯著降低（t=2.932，P=0.020<0.05），雖仍高于A組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t=1.262，P=0.236>0.05）。
　　3.球囊損傷及干細(xì)胞移植后不同時(shí)間點(diǎn)兔動(dòng)脈血清VEGF與TGF-β1水平變化呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.539，P=0.000）。

8、r>　　4.術(shù)后14d A組血管內(nèi)皮連續(xù)完整，管腔大小正常，B組血管內(nèi)膜下均有不同程度增生，且內(nèi)膜不連續(xù)，彈力層斷裂，中膜平滑肌細(xì)胞排列紊亂，管腔變窄，C組內(nèi)膜下增生較B組明顯減輕，管腔狹窄不明顯。
　　結(jié)論：
　　1.兔后肢動(dòng)脈內(nèi)膜損傷后血清VEGF和TGF-β1水平均有一定程度增高。
　　2.臍血干細(xì)胞移植后血清 VEGF升高幅度較單純球囊損傷組明顯增大，伴同期TGF-β1升高幅度明顯減小，兩者水平變化呈負(fù)相關(guān)關(guān)系